菊花组织培养论文

摘 要 :通过组培试验，初步得出了菊花组培育苗时最佳的诱导培养墓配方:用花瓣做外植体，在诱导培养基上接种诱导成愈伤组织，然后再在分化培养基上快速分化，之后在生根培养基上生根壮苗，再出瓶培养成生产用苗。

关 键 词 :菊花; 愈伤组织; 培养基；激素

. 菊花

菊科多年生宿根花卉，别名黄花、节华、秋菊、金蕊等。菊花原产中国，栽培历史悠久，品种丰富，花型花色千变万化，观赏价值极高。它是中国十大传统名花之～，也是世界上深受广大民众喜欢的园艺植物之一，与香石竹、月季、唐菖蒲一起被称为四大切花，畅销国际市场。

组织培养发展简史

1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞学说，奠定了组织培养的理论基础。 1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。

1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。 1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。

1934年，White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系，从而使非胚器官的培养首先获得成功。 1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了基础。

1962年，Murashinge 和Skoog 在烟草培养中筛选出至今仍被广泛使用的MS培养基。

19-1966年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。

1972年，Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养，获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。……

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材料与方法

1．实验材料

（1） 实验植株

菊花

（2） 实验器材

高压灭菌锅、超净工作台、培养箱、冰箱、天平、平底试管、剪刀、镊子、平皿、酒精灯、滤纸、烧杯、玻璃棒、橡胶塞、ph试纸。 (3) 实验试剂

贮备液Ⅰ（20×） V=500ml (按顺序逐一溶解) NH4NO3 33g KNO3 38g

CaCl2.2H2O 8.8g（含结晶水换算） MgSO4.7H2O 7.4g（含结晶水换算） KH2PO4 3.4g

贮备液 Ⅱ（200×） V=1000ml (按顺序逐一溶解) KI 0.166g H3BO3 1.24g MnSO4.4H2O 4.460g ZnSO4.7H2O 1.720g Na2MoO4.2H2O 0.050g CuSO4.5H2O 0.005g CoCl2.6H2O 0.005g

贮备液Ⅲ（200×） V=200ml (按顺序逐一溶解,调PH到5.5) Na2.EDTA.2H2O 1.492g FeSO4.7H2O 1..112g

(分开配再混在一起，FeSO4.7H2O不能加热要自然溶解，否则Fe2+会被氧化成Fe3+)

贮备液Ⅳ（200×） V=1000ml (按顺序逐一溶解) 肌醇 20g 烟酸 0..1g 盐酸吡哆醇 0.1g 盐酸硫胺素 0.02g 甘氨酸 0.4g

激素：生长素—α-萘乙酸（NAA） 细胞素—6-苄基腺嘌呤（6-BA） 其他: 蔗糖、琼脂粉、

2. 实验方法

(1) 配置四种储备液，见实验试剂 （2）配置激素

1mg/ml 6-BA：称取50mg的6-BA于烧杯中，加适量的氢氧化钠使其混匀，

再定容到50ml，倒入试剂瓶中。

1mg/ml NAA：称取50mg的NAA于烧杯中，加适量的无水乙醇使其混匀，

再定容到50ml，倒入试剂瓶中。 （3）MS培养基的配置

称取3g蔗糖于250ml的烧杯中，向其中加入适量的水溶解，再向其中加入贮

备液Ⅰ5 ml，Ⅱ0.5 ml，Ⅲ 0.5 ml，Ⅳ 0.5 ml,加水混匀定容到100ml。分装平底试管，每管20ml,，再往每管中加入0.14g的琼脂粉，最后往每管中加入不同浓度的生长素和细胞素，见下表： 激素 序号 6-BA 1.0 mg/L 20ul 1.0 mg/L 20ul 2.0 mg/L 40ul 2.0 mg/L 40ul 3.0 mg/L 60ul NAA 0.1 mg/L 2ul 0.3 mg/L 6ul 0.5 mg/L 10ul 0.3 mg/L 6ul 0.3 mg/L 6ul 1 3 4 5 2 (4) 调PH7.0，塞上橡胶塞，置灭菌锅中121℃灭菌20min。 （5）菊花花瓣的预处理

取菊花花瓣，用自来水洗3~5次，置于小烧杯中浸泡半小时，用70%乙醇浸泡15 s，无菌水清洗3次后，用2%次氯酸钠（吐温80 2滴）浸泡10 min，再用无菌水洗3~4次。于灭过菌的培养皿上，切割成0.5 cm×0.5 cm大小。 （6）诱导培养:将处理好的菊花花瓣接入到诱导培养基中，每管做好记号，放入

25℃温箱光照培养。

（7）分化培养：四个星期后，菊花花瓣变绿，将没污染且长势良好的菊花花瓣

组织切成小块无菌操作转入诱导培养基中。分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L

（8）生根培养：一个星期后，可看见叶子长出，将没污染且长势良好的菊花转

入生根培养基中培养。生根培养基MS+NAA 0.3 mg/L

实验结果

1、 诱导培养

第一周，菊花花瓣由外向内逐渐变绿。

第二周，绿色变深，部分地方厚度增加

第三周，周围卷起，厚度增加。

第四周，可以观察到小叶子长出

2、分化培养结果

可明显观察到叶子和根系

3、生根培养。（略）

三：结果分析

从试验结果可得出利用菊花组培繁殖程序:花瓣外植体——> MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L诱导培养——>MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L分化培养 ——>MS+NAA 0.3 mg/L生根培养,然后再栽培到合适的基质中培养成生产用苗。