２０１３年第１期 内蒙古石油化工 １ 沙葱多糖的提取纯化及纯度鉴定 邓 凤 ，扈瑞平ｈ ，敖长金 ，杜 琳。，张三润 ，薛 昕 ，娜 琴 （１．内蒙古医科大学基础医学院；２．内蒙古农业大学动物科学与医学院； ３．内蒙古师范大学生命科学与技术学院，内蒙古呼和浩特０１００００） 摘要：采用热水浸提法提取沙葱多糖，三氯乙酸法除蛋白，活性炭脱色，Ｓｅｐｈａｄｅｘ凝胶柱层析纯 化，收集单一峰溶液命名为ＳＣＳＰ，对纯化产物ＳＣＳＰ分剐采用紫外分光光度法、纸层析法、比旋光度法、 凝胶柱层析４种方法联合检验其纯度，结果表明，在波长２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处无核酸和蛋白的明显吸收， 纸层析见单一染色海蓝色斑点，比旋光度测定结果均一致为＋５１．３６。，凝胶柱层析结果显示出现了单一 狭窄对称峰，以上纯化结果综合表明ＳＣＳＰ为均一组分多糖。 关键词：沙蒽多糖；提取纯化；纯度鉴定 ． 中图分类号：ＴＱ４６０．７ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６－－７９８１（２０１３）１—０００１—０３ 沙葱（Ａｌｌｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｒｅｇｅ１）属被子植物 合格的多糖样品。 门（Ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍａｅ），百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ），葱属（Ａｌｌｉ— ｌ试验材料 ｕｍ），学名蒙古韭，别名蒙古葱，蒙葱，蒙文名为胡穆 １．１试验材料 利。它广泛分布于我国西北和内蒙古荒漠地区，是一 新鲜沙葱于每年６、７月份采自内蒙古鄂尔多斯 种可食用的野生蔬菜，地上部分可人蒙药ｎ］。该种植 鄂托克旗天然草场，保鲜袋分装一２０￣Ｃ冰箱保存。使 物十分耐旱、耐寒、抗病性强，主要生长于荒漠草原 用时６５￣Ｃ烘箱烘干后准确称重用于多糖提取。 带，半荒漠及荒漠带的沙地和干旱河坡［２］，是内蒙古 １．２主要试剂与仪器 草原的一种优质牧草，也是有待开发的宝贵遗传资 １．２．１主要试剂 源。 无水乙醇、９８ 浓硫酸、苯酚、活性炭、氯仿、正 天然植物多糖具有抗菌、抗病毒、增强免疫力和 丁醇、三氯乙酸，由北京化工厂生产；葡萄糖购自 促进动物生长等作用［３］，是确保饲料和动物性食品 Ｓｉｇｍａ公司；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－－１００购自ＰｈａｒｍａｃｉａＣｏ；以 安全以及人体健康的理想添加剂。多糖的提取是研 上试剂均为分析纯。 究多糖的前期重要基础，常用的多糖提取方法有：热 １．２．２主要仪器 水浸提法［ 副、酸浸提法［副、碱浸提法［７］、酶法［８］、超 紫外／可见分光光度计（Ｌａｂ Ｔｅｃｈ型，Ａｔｈｅｎａ 声波和微波萃取法，一般植物多糖的提取多数采用 Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ）；旋转蒸发器（ＲＥ５２ＣＳ型，上 热水浸提法。 海亚荣生化仪器厂）；冷冻干燥机（ＦＤ一１型，北京 对提取的多糖进行除蛋白、脱色和凝胶柱层析 博医康技术公司）；自动旋光仪（ＷＺＺ－－２Ａ型，上海 纯化，经过纯化的多糖在测定结构前须进行纯度鉴 精密科学仪器有限公司）；循环水式多用真空泵 定。多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准来衡 （ＳＨＢ一ⅢＡ型，巩义市予华仪器有限公司）；高速冷 量，因为即便是多糖纯品，其微观也并不均一，仅代 冻离心机（ＧＬ一２２Ｍ型，湖南ＳＴＸＹ离心机仪器有 表相似链长的多糖分子的平均分布，通常所谓的多 限公司）。 糖纯品也只是一定相对分子质量范围的多糖的均一 ２试验方法 组分。目前常用于多糖纯度的鉴定方法有：凝胶层析 ２．１ 沙葱多糖的提取和纯化 法、电泳法、色谱法、旋光度法等，必须指出纯度鉴定 自制沙葱多糖（ＳＣＳＰ）：将烘干后沙葱用９８ 的 须用两种方法以上结果才肯定［９］。本研究从沙葱中 工业酒精按１：８的比例（烘干沙葱：酒精）７０￣Ｃ脱 提取纯化活性物质多糖，采用多种方法对其纯度进 脂１次，６５℃烘干后按２０：１的水料比８０￣Ｃ浸提８ｈ， 行鉴定，为进一步的基础理论研究及应用研究提供 抽滤弃去残渣后的多糖提取液经旋转蒸发仪浓缩到 收稿日期：２Ｏ１２一ｌＯ～１５ 基金项目：国家自然科学基￣－（ＮＯ．３０９６０２５３）资助。 作者简介：邓Ｊ￣（１９７９－－），女，实验师，内蒙古医科大学基础医学院。 ２０１３年第ｉ期 邓凤等 沙葱多糖的提取纯化及纯度鉴定 ３ 由图３可见，ＳＣＳＰ凝胶柱层析洗脱曲线为单一 Ｓｅｏｔｓ ｐｉｎｅ［Ｊ］．Ｗｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｅｈｎｏｌ，２００４，３８ 狭窄对称峰，说明为均一组分多糖 （３）：１７３￣Ｉ７９． ４ 讨论 Ｉ－６］Ｈ．Ｆｕｒｕｔａ，Ｈ．Ｍａｅｄａ．Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ ＰｒｏＰｅｒｔｉｅｓ 多糖是大分子化合物，它的纯度标准不能用通 ｏｆ ｗａｔｅｒ—ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｏｙｂｅａｎ Ｄｏｌｙｓａｃｃｈａ一 常小分子化合物的纯度标准来衡量，因为即使是多 ｒｉｄｅｓｅｘｔｒａｅｔｅｄ Ｕｎｄｅｒ ｗｅａｋ ａｃｉｄｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ 糖纯品，其微观也是不均一的，它的纯度只代表某一 ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ，１９９９，１３（２）：２６７ 多糖的相似链长的平均分布。多糖纯品指的是一定 ２７４． 分子量范围内的均一组分。通常进行多糖纯度鉴定 ［７３王仲孚，黄琳娟．钝顶螺旋藻多糖ＳＰＰＣ—ｌ的 的方法均有一定程度的误差，必须要选择两种以上 分离纯化、性质及活性的研究［Ｊ］．中国海洋药 的方法才能最终确定其均一性［１ 。本研究采用紫外 物，２００１，８１（３）：１７￣２０． 光谱法、纸层析法、比旋光度法和凝胶过滤法４种方 ［８］连宾，郁建平．红托竹荪多糖的提取、分离及组 法检验纯化后沙葱多糖ＳＣＳＰ的纯度。ＳＣＳＰ的紫外 成研究口］．食品科学，２００４，２５（３）：４３￣４５． 分析结果表明在波长２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处无核酸和 Ｉ－９］ 陈石良，孙震，谷之英，等．灰树花深层发酵菌 蛋白的明显吸收，纸层析见单一染色斑点，比旋光度 丝体多糖的酶法提取及抗肿瘤作用［Ｊ］．无锡 测定结果均一致为＋５１．３６。，凝胶柱层析结果显示 轻工大学学报，２０００，１９（４）：３３６～３３９． 只出现了单狭窄一对称峰，以上纯度鉴定结果综合 ［１０］张维杰．糖复合物生化研究技术［Ｍ］．杭州： 表明提取纯化得到的沙葱多糖为均一组分多糖。 浙江大学出版社，１９９４． 蚓 口妇 募誓 茎冀 萋鬈 ［１］包颖．内蒙古葱属植物的地理分布［Ｊ］．内蒙古 报（自然科学版），２０００，３６（５）：５７９￣５８４． 师大学报自然科学（汉文）版，２０００，６（２９）：１３０ ［１２］ 樊黎生．黑木耳多糖ＡＡＰ—ａ级分的制备及 ～１３５． 其生物活性的研究［Ｄ］．化中农业大学博士 ［２］ 中国植物志编辑委员会．中国植物志（１４卷） 论文，２００６：２６． ［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８０：１７０￣１７２． ［１３］ 陈洪亮．植物多糖的制备及对肉仔鸡免疫功 ［３］ 汪志好．植物多糖的研究进展（综述）［Ｊ］．安徽 能影响的研究［Ｄ］．中国农业科学院博士论 卫生职业技术学院学报，２００７，６（２）：８６～８７． 文，２００２：３６～３７． ［４］ 崔亦华，崔英德．应用广泛的天然多糖及其提 ［１４１ 徐光域，颜军，郭晓强，等．硫酸一苯酚定糖法 取方法［Ｊ］．广州化工，２００２，３０（３）：８～９． 的改进与初步应用口］．食品科学，２００５，２６ ［５］ Ｓｔｅｆａｎ Ｗｉ１１ｆｏｒ，Ｂｊａｍｅ Ｈｏｌｍｂｏｍ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ （８）：３４２ ３４６． ａｎｄ ｃｈａｒａｅｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｓｏｌｕｂｌｅ ［１５１ 张维杰．糖复合物生化研究技术（第二版） Ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｎｏｒｗａｙ ｓｐｒｕｅｅ ａｎｄ ［Ｍ］．杭州：浙江大学出版社，１９９９：９４～９７． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ａｎｄ Ｐｕｒｉｔｙ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｌｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｕｍ Ｒｅｇｅｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ＤＥＮＧ Ｆｅｎｇ ，ＨＵ Ｒ —ｐｉｎｇ ．．，Ａ０（ 口 ｇ一 ，ＤＵ Ｌｉｎｇ ，ＸＵＥ Ｘｉｎ ，ＺＨＡＮＧ 口 一ｒ ，Ⅳ Ｑ （１．Ｂａｓｉｃ Ｃｕｒｒｉｃｕｌｕｍ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；３ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１００００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ Ｈｏｔ—ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ Ａｌｌｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｒｅｇｅｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ， ｔｈｅ Ｓｅｖａｇｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔＯ ｒｅｍｏｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ａｌｌｉｕｍ Ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｒｅｇｅｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ｔｈｕｓ ａｃｔｉｖｅ ｃａｒｂｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｄｅｃｏｌｏｒｅｄ Ａｌｌｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｒｅｇｅｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ＳｅｐｈａｄｅｘＧ——１００ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｓｉｎｇｕｌａｒ ｐｅａｋ ｌｉｑｕｏｒ ｎａｍｅｄ ＳＣＳＰ．Ｉｔｓ ｐｕｒｉｔｙ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒａ，ｐａｐｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｏｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ＳＣＳＰ ｈａｖｅ ｎｏｔ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｂｓｏｒｐｅｄ ｔｏ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｔ ２６０ｎｍ ａｎｄ ２８０ｎｍ ｏｆ ｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ，ｐａｐｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｓｉｎｇｕｌａｒ ｃｏｌｏｒｅｄ ｓｐｏｔ，ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｄｅ— ｔｅｒｍｉｎｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ＋５１．３６。，ａｎｄ ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｓｉｎｇｕｌａｒ ｐｅａｋ．Ａｂｏｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ＳＣＳＰ ｉｓ ａ ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｎｅｕｔｒａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｌｌｉｕｍ Ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｒｅｇｅｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｐｕｒｉｔｙ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ—
