Journal of Nantong University (Medical Sciences ) 2019 ： 39 ( 5 )
DOI:10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2019.05.017
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厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片的溶出度研究
缪 红1，徐丹洋2，王素素2，苏 健
2*
(1江苏省南通市妇幼保健院药事科，南通 226018； 2江苏省南通市食品药品监督检验中心)
[摘 要] 目的：观察厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片溶出度方法。方法：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水溶液(水50 mL加三乙胺0.15 mL，用冰醋酸调pH至3.3)(1︰1)为流动相；检测波长为272 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量20 μL；按照《中国药典：2015年版》四部溶出度与释放度测定法第二法操作，观察厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片在50、75、100 r/min 3种转速对该剂型溶出的影响，盐酸溶液(9→1 000)900 mL和盐酸溶液(24→1 000)900 mL两种溶出介质下厄贝沙坦和氢氯噻嗪的溶出情况，以及不同取样时间的溶出量。结果：转速对厄贝沙坦氢氯分散片的溶出速率无显著影响。厄贝沙坦在两种溶出介质下稳定性良好，溶出情况良好；氢氯噻嗪在盐酸溶液(9→1 000)下稳定性良好，溶出情况良好，由于盐酸溶液(24→1 000)酸度较高，使暴露在日光和空气中的氢氯噻嗪溶液极不稳定，短时间内会有分解产物产生，溶出情况不佳。结论：建议采用《中国药典：2015年版》四部溶出度与释放度测定法第二法，更改溶出条件为转速50 r/min，溶出温度37 ℃，盐酸溶液(9→1 000)900 mL作为溶出介质，采样时间30 min，对厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片进行溶出度检查。
[关键词] 厄贝沙坦；氢氯噻嗪；分散片；溶出度；稳定性
[中图分类号] R972+.4 [文献标志码] B [文章编号] 1674-7887(2019)05-0397-03
厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片是一种血管紧张素Ⅱ的受体拮抗剂加利尿剂组成的复方制剂。该剂型最早为欧洲专利是采用一水乳糖和微晶纤维素做填充剂，EP1275391公开[1]，
交联羧甲基纤维素钠为崩解剂，预胶化淀粉为粘合剂，硬脂酸镁为润滑剂，二氧化硅为助流剂，氧化铁为着色剂。但因所采用的粘合剂预胶化淀粉在生产过程中用水量、温度等因素的影响，产品在粒度分布上有所差别，从而影响药物的溶出与药效的发挥。厄贝沙坦、氢氯噻嗪联合应用制定复方片剂，用于治疗原发性高血压，可阻止肾素血管紧张素醛固酮激活[2]，减少容量负荷，两种药物成分具有一定的协同作用，安全性较高，不良反应轻微，有效提高了治疗效果。厄贝沙坦和氢氯噻嗪两种原料药难溶于水，制成分散片后，能使药物在水中迅速崩解并均匀分散开来，便于人体分布和吸收。溶出度是药但在日常检验过程中，按照国品质量检查的一个重要指标，
家食品药品监督管理局标准YBH13022008检验，经常会有该制剂氢氯噻嗪溶出度不合格的现象。本研究通过对2017—2019年的同一批准厂家生产的3个批次厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片进行溶出度方法考察，确定合理的溶出度检查方法。1 仪器与试药
1.1 主要仪器 RCZ-8M溶出仪(天大天发)、U3000高效液相色谱仪(戴安)、KQ0300DB型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)、BT125D电子分析天平(德国赛多利斯)、C18色谱柱[Diamonsil C18(4.6×150 mm, 5 μm), Agilent Eclipse Plus C18(4.6×250 mm, 5 μm)]、Advantage A10超纯水仪(Mil-li-Q)。
1.2 试药 3个批次厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片(江苏万高，
* [通信作者] 苏健，电话：15851215925，E-mail: 850785660@qq.com
[3]
批号分别为1710311、1809042、 1901162，规格：每片含厄贝沙坦150 mg，氢氯噻嗪12.5 mg)；厄贝沙坦对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100607-201202，质量分数0.998)、氢氯噻嗪对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100309-201404，质量分数0.997)、盐酸(分析纯)、三乙胺(分析纯)、乙腈(色谱纯)、超纯水(实验室自制)。2 方法与结果
2.1 高效液相色谱法的确定
2.1.1 色谱条件的选择 采用国家食品药品监督管理局标准YBH13022008色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水溶液(水50 mL加三乙胺0.15 mL，用冰醋酸调pH至3.3)(1︰1)为流动相；检测波长272 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量20 μL。
2.1.2 标准溶液的制备 精密称取厄贝沙坦对照品10.82 mg置于100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密称取氢氯噻嗪对照品9.34 mg置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述两种溶液各10、1 mL置于同一50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀，即得。
2.1.3 线性关系考察 精密量取上述标准溶液，在上述色谱条件下分别进样5、10、20、50、100 μL进行测定，以厄贝沙坦、氢氯噻嗪的质量为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，求得回归方程：
Y=814.296 1X-5.980 4, r=0.999 9厄贝沙坦：
Y=3837.469 8X+1.429 1, r=0.999 9氢氯噻嗪：
由此可知，厄贝沙坦在0.11~2.16 μg范围内，线性关系良
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南通大学学报（医学版）
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好；氢氯噻嗪在0.009 3~0.1800 μg范围内，线性关系良好。2.1.4 精密度试验 精密量取标准溶液，在上述色谱条件下连续进样6针，计算厄贝沙坦峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为0.12%，氢氯噻嗪峰面积的RSD为0.23%，表明仪器精密度良好。
2.1.5 稳定性试验 精密量取转速为50 r/min，以盐酸溶液(9→1 000)为溶出介质，取样时间为30 min的供试品溶液分别在2、4、8、12、24 h进样，计算厄贝沙坦峰面积的RSD为0.18%，氢氯噻嗪峰面积的RSD为0.26%，表明供试品稳定性良好。
2.1.6 重复性试验 取3批次的供试品各6粒，按转速为50 r/min，以盐酸溶液(9→1 000)为溶出介质，取样时间为30 min的溶出条件试验，厄贝沙坦及氢氯噻嗪的溶出度均在80%以上，表明该方法重复性良好。
2.2 供试品的确认 取3个批次厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片按国家食品药品监督管理局标准YBH13022008含量测定方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行厄贝沙坦、氢氯噻嗪的含量测定，2017—2019年3批次厄贝沙坦含量分别为100.6%、100.4%、101.2%；氢氯噻嗪含量分别为101.2%、98.6%、97.6%。证明该3批样品作为溶出度试验的供试品是合理有效的。2.3 溶出度方法的确定
2.3.1 装置的选择 国家食品药品监督管理局标准YBH13022008规定，按照《中国药典》2015年版四部溶出度与释放度测定法第二法进行测定。
2.3.2 转速的选择 考察50、75、100 r/min转速下的溶出情况。结果表明：转速对厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片的溶出速率影响不大，3种转速下的溶出速率无显著差异，故保持原标准50 r/min转速不变。
[4]
2.3.3 溶出介质的选择 国家食品药品监督管理局标准YBH13022008规定，厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片溶出度检查法中溶出介质为盐酸溶液(24→1 000)。国家食品药品监督管理局药品补充申请批件批件号：2013B00255规定，厄贝沙坦氢氯噻嗪片溶出度检查法中溶出介质为盐酸溶液(9→1 000)。考察这两种溶出介质下的3批分散片的溶出情况。结果表明：厄贝沙坦在两种溶出介质下稳定性良好，溶出情况良好；氢氯噻嗪在盐酸溶液(9→1 000)下稳定性良好，溶出情况良好，在盐酸溶液(24→1 000)下稳定性较差，氢氯噻嗪极易分解产生分解产物，氢氯噻嗪的溶出量较低。不同批次的分解程度存在差异，可能与各批次原料性质有关(图1~4)。
2.3.4 取样时间考察 考察5 min、15 min、30 min、1 h、2 h在两种溶出介质下对5个采样时间点绘制溶出曲线，见图1~2。结果表明盐酸溶液(9→1 000)为溶出介质，30 min后样品中厄贝沙坦、氢氯噻嗪的溶出量变化均不大，故以30 min为采样时间为宜。盐酸溶液(24→1 000)为溶出介质时，氢氯噻嗪、厄贝沙坦溶出均较盐酸溶液(9→1 000)中快，在15min后溶出量变化均不大。但氢氯噻嗪极度不稳定，溶出量各批次差异有统计学意义。
A100
溶出度/%95908580
0 30 60 90 120
B100
溶出度/%2017年2018年
溶出时间/min
2019年
95908580
0 30 60 90 120
2017年2018年2019年
注：A，氢氯噻嗪；B，厄贝沙坦。
2017年
2018年2019年
溶出时间/min
图1 盐酸溶液(9→1 000)中溶出曲线
A
100806040
0 30 60 90 120
B
溶出度/%1101051009590
0 30 60 90 120
溶出度/%2017年2018年2019年
溶出时间/min
溶出时间/min
注：A，氢氯噻嗪；B，厄贝沙坦。
图2 盐酸溶液(24→1 000)中溶出曲线
吸光度/mAU吸光度/mAU时间/min
Diamonsil C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱
图3 盐酸溶液(9→1 000)，30 min供试品色谱图
时间/min
吸光度/mAU时间/min
吸光度/mAU吸光度/mAU时间/min时间/min
吸光度/mAU时间/min
Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm)色谱柱图4 盐酸溶液(24→1 000)，30 min供试品色谱图
Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.缪红，等.厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片的溶出度研究2.3.5 正交试验考察 为考察氢氯噻嗪在盐酸溶液(24→1 000)溶出介质中不稳定的原因，取12.5 mg的氢氯噻嗪对照品直接置于溶出杯，模拟在无辅料干扰的情况下的溶出曲线，实验表明对照品在该溶出条件下也会产生分解产物，排除辅料对氢氯噻嗪稳定性的影响。取12.5 mg的氢氯噻嗪对照品置1 000 mL量瓶，加盐酸溶液(24→1 000)900 mL超声使溶解，按溶出度检查法稀释制成供试品溶液，考察在密闭、避光条件下12 h内氢氯噻嗪盐酸溶液(24→1 000)的稳定性，结果表明该条件下盐酸溶液(24→1 000)对氢氯噻嗪稳定性无影响。在此基础上，设计正交试验，以阳光(因素A)、空气(因素B)、37 ℃水浴温度(因素C)进行考察。因素水平见表1。表明在盐酸溶液(24→1 000)的酸化及日光的照射下，氢氯噻嗪易被空气氧化，产生3个明显的分解产物，在37 ℃水浴中分解更为显著。且伴随暴露时间的增长，分解产物显著增大(图5)。
表1 L8(23)因素水平表
水平12345678
因素A++++----因素 B++--++--因素 B+-+-+-+-结果YYNNNNNN
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D.L.HERTZOG等[6]发现氢氯噻嗪主要降解产生4-氨基-6-氯-1，3-苯二磺胺(benzenedisuiphonamide, DSA)和甲酸，并且在生产及储存中容易产生有关物质氯噻嗪(chlorothiazide, CTZ)和氢氯噻嗪二聚物(hydrochlorothiazide-CH2-hydrochlorothiazide, HCTZ-CH2-HCTZ)。王宁[7]在厄贝沙坦复方制剂的研究中也提到，氢氯噻嗪在酸破坏、碱破坏及强氧化剂破坏下均可产生降解产物DSA、CTZ等。本研究中，在氢氯噻嗪前后也产生3个明显降解产物，可进一步进行成分确认。
厄贝沙坦氢氯噻嗪复合制剂目前国内有八家企业在生产，包括胶囊剂、普通片剂和分散片3种剂型。随着对辅料的不断改进及氢氯噻嗪原料药合成工艺的不断优化，使得药品本身的稳定性越来越高。而分散片的剂型具有提高难溶性药物的生物应用度，用微小的剂量展现出巨大功效，减少药物的毒副作用的优势[8]。优化好厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片质量标准对保障药品质量至关重要，严谨有效的标准会减少企业少走很多弯路，同时我们也应严格按照检验标准操作规程完成检验检测工作，遇到问题及时排除，减少好的药物因检验标准不合理而流失的现象。
[参考文献]
[1] KU C, SPROCKEL O, RUBITSKI B, et al. Pharmaceutical
compositions containing irbesartan and a diuretic[P]. EP: 1275391(A1), 2003-01-15[2019-05-24].
[2] MCGILL JB, REILLY PA. Telmisartan plus hydrochlorothi-azide versus telmisartan or hydrochlorothiazide monotherapy in patients with mild to moderate hypertension: a multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel-group trial[J]. Clin Ther, 2001, 23(6):833-850.
[3] 郝利华, 郭桂芳, 于晓辉, 等. 溶出度测定在药物制剂研发与
质量评价中的应用进展[J]. 中国兽药杂志, 2013, 47(6):67-69.
[4] 国家食品药品监督管理总局.《中国药典》2015年版四部通
注：+，起作用；-，不起作用；Y，有影响；N，没有影响。
吸光度/mAU时间/min
图5 30 min、1、2、3 h暴露于阳光、空气，37 ℃水浴中氢
氯噻嗪分解趋势图3 讨 论
以盐酸溶液(24→1 000)为溶出介质，所得供试品溶液酸度较大，在此条件下氢氯噻嗪对光照、空气和温度较为敏感，整个溶出环节需严格避光，完成取样后需及时处理样品。《美国药典》[5]中厄贝沙坦氢氯噻嗪片采用0.1 mol/L盐酸溶液作为溶出介质，且本次实验也证明了在转速50 r/min，溶出温度37 ℃，溶出介质为盐酸溶液(9→1 000)900 mL，采样时间为30 min，厄贝沙坦氢氯噻嗪分散片中两组分稳定性及溶出情况均良好，建议国家食品药品监督管理局标准YBH13022008修改溶出度方法。
则(0931)[S]. 北京:中国科技出版社, 2015:121-124.
[5] The United States pharmacopieial convention USP35[M].
Irbesatan and Hydrochlorothiazide Tablets, 2011:3558-3559.[6] HERTZOG DL, MCCAFFERTY JF, FANG XG, et al. Devel-opment and validation of a stability-indicating HPLC method for the simultaneous determination of losartan potassium, hy-drochlorothiazide, and their degradation products[J]. J Pharm Biomed Anal, 2002, 30(3):747-760.
[7] 王宁. 厄贝沙坦氢氯噻嗪复方制剂的研究[D]. 郑州: 郑州大
学, 2012.
[8] 黄大福. 分散片研究进展[J]. 临床医药文献电子杂志, 2017,
4(47): 9289-9291.
[收稿日期] 2019-05-24
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