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桑椹成熟过程中1-脱氧野尻霉素和花青素含量变化规律

来源:星星旅游
2018年第4期

香桑茶叶通讯

桑椹成熟过程中1 -脱氧野尻霉素和花青素含量变化规律

黄金枝

(江西省蚕桑茶叶研究所330202)

摘要:采用高效液相色谱法$ HPLC %检测分析桑椹成熟过程中生物碱和花青素2类活性物质的含量变化 规律,以期为桑椹的采收适期提供参考。结果表明:桑椹在成熟过程中,1 -脱氧野尻霉素(DNJ)的含量呈现 逐渐降低的趋势,而矢车菊素-3 - 0 -葡萄糖苷$ C3G)和矢车菊素-3 - 0-芸香糖苷$ C3R) 2种花青素的 含量却呈现增加的趋势,其中在粉红期前增加缓慢,粉红期后急剧上升,2种花青素的含量差异较大,桑椹成熟过程中C3R的含量明显高于C3G的含量。

关键词:桑椹;DNJ;花青素;高效液相色谱法桑椹系桑科植物桑的成熟果实,又名桑果、桑实 和桑枣。桑椹属浆果类型,营养丰富,含有丰富的花 色苷、白藜芦醇等黄酮类活性成分以及多糖、氨基 酸、碳水化合物、有机酸、维生素、矿物质等多种基础 营养成分*1],是制作现代食品和保健产品的优质天 然原料*2〜3+。

桑椹收获时间比较集中,果薄,汁液多,组织娇 嫩,在收获和运输的过程中很容易软化、腐烂,并且 严重影响它的营养和经济价值。通过了解桑椹发育 成熟期间的营养活性成分含量变化规律,能够为桑 椹适时采摘和实施相应的保鲜技术措施提供理论依 。1

材料与方法

科技公司)。

1.2桑椹生物碱的测定45 51.2.1样品制备

取新鲜桑椹10g,研磨均勻,得到桑椹浆,取10g 桑椹浆于50mL离心管中,加入0. 05m〇l/L盐酸溶 液10mL,祸旋提取3min,离心15min(转速12 000H

min),取上清液,同法重复提取一次,离心,合并2次

提取液并转移3 50mL容量瓶,蒸馏水定容即得。 1.2.2标准溶液配制及工作曲线建立

准确称取20mgDNJ标准品于25mL容量瓶中, 加超纯水溶解并定容,即得0. 8g/L的DNJ标准溶 液,稀释至质量浓度为60!g/mL、120!g/mL、180!g/

mL、240!//mL、300!//mL、480!g/mL 备用。以 DNJ

1=材料及主要试剂和仪器

试验对象为无籽果桑大十,采自江西省蚕桑茶 叶研究所果桑园。对桑椹果实的发育期进行划分, 依次为全绿期、半粉红期、粉红期、全红期和紫黑

期*4]。同一发育期采摘桑椹2 kg,并迅速带回实验 室,存放在-80°C冰箱中备用。测定时将其研磨混 勻,准确称取一定重量,重复取3次,用于成熟过程 中DNJ和花青素含量测定。

生物碱标准品为1 -脱氧野尻霉素,花青素标 准品为矢车菊素-3 - 0-葡萄糖苷和矢车菊素-3 -0-芸香糖苷。盐酸、硼酸钾、FM0C-C1、乙腈、 甘氨酸、醋酸、乙醇、偏磷酸、磷酸为色谱纯。

设备:Agilent 1260高效液相色谱(美捷伦

资助项目:现代农业产业技术体系专项(CARS -18 -05B)

的质量浓度为纵坐标,吸光度为横坐标绘制标准曲

线,得DNJ的标准曲线线性回归方程。1.2.3衍生化反应*5]

取DNJ提取液(或DNJ标准液)100!L,再加入 5mm〇l/L的FM0C-C1$溶解于乙腈中)200!L,混勻 后于25C水浴20min。加入1m〇l/L甘氨酸100!L 中和剩余的FM0C-C1以终止反应,加入1[醋酸 100!L及超纯水400!L,以0. 45!m微孔滤膜过滤 器过滤,收集滤液备测。空白对照以蒸馏水代替 DNJ提取液进行衍生化反应。

1.2.4 HPLC检测条件*5]

色谱柱C18柱$150爪111\\4.6爪111\\5!〇1);荧光检 测器激发波长2nm,发射波长322nm;流动相为乙 腈-0. 1[醋酸$体积比50 :50 );流速1.0mL/min;

• 1 •

蚕桑茶叶通讯

总第196期

柱温25°C;进样量1(VL。1.3桑椹花青素的测定[6]1.3. 1样品制备

取新鲜桑椹l〇g,研磨均匀,得到桑椹浆,取5; 桑椹浆加入20mL酸性乙醇(含1%HC1),超声波捐 取30min,12 000r/min离心lOmin,取上清液作检狈 样品。

1.3.2标准溶液配制及工作曲线建立

准确称取C3G标准品lmg和C3R标准品lmg 分别加入lmL和50(VL混合液(无水乙醇:偏磷酸 1525

超纯水=3:1:6)作为储备液,4°C保存备用。以质i 浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,建立花青素标准由 线。

1.3.3 HPLC检测条件[6]

谱柱:ZORBAX SB - C18 色谱柱(4. 6mm X 250mm,5!m)。流动相A为 ,B为0.4%磷酸。

流动相A洗

序为!0〜10min,9%〜15%

;10

〜20min,15% 〜35% 乙腈;20 〜24min,35% 〜9% 乙 腈。流动相B洗脱程序为!0〜10mi,91%〜85%磷 酸;10 〜20min,85% 〜65% 磷酸;20 〜24min,65% 〜 91%磷酸。流 1.0mL/min,检波长520nm,柱温 30Y,进样量20!L。1.4数据分析

采用Excel对测定数据进行处理分析。2

结果与分析

2.1桑椹成熟过程中.NJ含量变化

采用HPLC法对桑

期间的DNJ 1

检测,以 品的质量浓度为横坐标,色谱峰面积为

纵坐标,得到DNJ 检 工作曲线y =6.667x+35.26(R2 =0.999),通过峰面积 曲

线计算出桑 DNJ

,所得结果见

图1。如图1所

,桑从全绿期到 期,桑DNJ1

下降,至

为零。即绿

期DNJ

高,而随着桑 断

,DNJ含

减少,说明DNJ主

其器

,如叶、

。绿期桑

DNJ

高, 品质 ,

少,

适合桑

加工,DNJ1

桑叶, 合适

作为生产DNJ产品

发*7]。

图1

桑椹成熟过程中DNJ含量变化

2=桑椹成熟过程中花青素含量变化

采用HPLC法对桑椹成

行检测,以 品的质量浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,得到C3G 检 工作曲线y=3639x -4=81 ( ' = 0. 999 %,C3R 含量检测的标 准工作曲线 y =6756.5x+49.243(R2 =0.997)。通

面积 曲线计算桑

期间+3V

+3' ,结如图1所。桑

+3V

C3R 呈 加

,在桑

粉红期前均缓慢增加,粉红期后2种

急剧上升;2种 ,C3R

高C3G

。桑

绿

色变为粉红色,再到紫红色,最后为

色,这种

,主

方面

:①

叶绿 , 积

;②随着

pH 升,花色

色调发生了改变。

0

987o6

ooo

5

o

o

4

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M

赋o

3^图2桑椹成熟过程中花青素含量的变化

2018年第4期

蚕桑茶叶通讯

[4]黄金枝,朱敏婕,俞燕芳,等.桑椹成熟过程中酚类物质

3讨论

生物碱D!作为一种高效的$ -糖苷酶抑制

及总黄酮含量的动态变化[J].蚕桑茶叶通讯,2017(5):1 - 3.

[5 ]肖洪,丁晓雯,黄先智,等.不同桑品种桑叶中的3种生物 活性物质含量测定[J].蚕业科学,2013,39(6): 1 145 -1 149.[ 6 ] 317 -321.

[7]殷浩,佟万红,王振江,等.桑椹成熟过程中部分活性成 分的含量变化[J].蚕业科学,2011,37(6):1 106 ~1 110.剂,是桑树体内次生代谢产生的一种重要防御物 质[84]。从本实验的检测结果可以看出,桑椹在全

绿期的D!含量很高,而随着桑椹逐渐成熟,DNJ 含量逐渐减少。本实验检测在桑椹全绿期花青素的 含量几乎为0,随后逐渐缓慢增加,到粉红期开始大 量合成花青素,其含量迅速增加,紫黑期桑椹中花青 素C3G和C3R的含量均达到最大值,这与在葡萄、 , 晓 , , .2 桑 品种 桑 期间

生物碱和花青素含量变化规律[J ].蚕业科学,2016,42 (2):

荔枝等果实中的研究结果一致[10~11]。在桑椹成熟 期间,DNJ含量逐渐减少,而C3G和C3R的含量逐 渐增多,因此,生产上需根据加工桑椹食品的保健功 效采收不同成熟期的桑椹做原料。参考文献

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[2]王英豪,陈志春,张理平,等.响应面法优化桑椹黄酮 超声辅助提取工艺及对酪氨酸酶活性抑制研究[J].中国中 医药信息杂志,2016(2): 93 ~97.

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[9] Hirayama C,Konno K,Wasano N,et al. Differential effects of sugar - mimic alkaloids in mulberry latex on sugar metabolism and disaccharidases of Eri and domesticated silkworms: enzy­matic adaptation of Bombyx mori to mulbery defense [ J ]. In­sect. Biochem. Mol . Biol.,2007,37( 12) : 1 348 ~1 358.

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[11] 王惠聪,黄旭明,胡桂兵,等.荔枝果皮花青苷合成与相 关酶的关系研究[J].中国农业科学,2004,35( 7) : 2 028 - 2 032

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