70mgRNaseA0.18-0.25mmol/mL介质球形45~165μm300cm/h4~40℃0.3MPa3~14(短时间，在位清洗)，4~13(长时间)第1页共3页北京索莱宝科技有限公司pH工作范围化学稳定性4~13在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。操作说明：1.装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。2.平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如NaAC、PBS等。3.上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用SP琼脂糖介质时，推荐的pH值是小于目标产品等电点1个单位。4.洗脱SP琼脂糖介质可用增大盐浓度或增大pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。5.再生第2页共3页北京索莱宝科技有限公司一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/LNaCl）洗或增大pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。6.在位清洗（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1MNaOH去除。（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。7.注意在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。8.去热源用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：（1）2倍柱体积的70%乙醇；（2）2倍柱体积50mMTris-HclpH7.5；（3）1倍柱体积4M尿素；（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNacl；以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。9.消毒0.5~1MNaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。第3页共3页
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容