Vol. 48 No. 1 2020年2月
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY OF TECHNOLOGYFeb. 2020
珊瑚菌子实体多糖结构鉴定与抗氧化活性
何荣军，金巧艳，刘高丹，易千红，孙培龙
(浙江工业大学海洋学院，浙江杭州.310014)
摘要：从珊瑚菌子实体中分离纯化得到多糖组分RFPF2A，并研究其化学结构特征和抗氧化活性。 采用 DEAE sepharose fast flow 离子柱、Sephacryl G-25 和 S-400 High-resolution 凝股柱层析进行 分离纯化，经红外光谱、高效液相色谱、气相色谱-质谱联用和核磁共振等谱图分析确定多糖的结构 组成，并测定RFPF2A的羟基自由基清除能力、超氧阴离子清除能力、亚铁离子金属螯合能力和总 还原力。结果表明：RFPF2A分子质量为9. 87X 102 kDa,由/Hl，6)-D-吡喃葡萄糖、a-(l,2,6)-I> 吡喃半乳糖和/?\"(1，4)-D■吡喃甘露糖组合而成，摩尔比为，K葡萄糖）：77(半乳糖）：《(甘露糖）= 1 : 0. 15 : 0. 26。当多糖质量浓度为5 mg/mL时，羟基自由基的清除能力达60%,超氧阴离子清 除能力达74. 47%,亚铁离子金属螯合能力达61. 82%,还原力吸光值达1. 506。因此，RFPF2A多 糖具有显著的抗氧化活性，并表现出一定的质量浓度依赖性。关键词：珊瑚菌；多糖；结构分析；核磁共振；抗氧化活性中图分类号：（)629
文献标志码：A
文章编号：1006-4303(2020)01-0073-07
Structure determination and antioxidant activity investigation of a watei^soluble
heteropolysaccharide from fruiting bodies of Ramaria flava
HE Rongjun.JIN Qiaoyan.LIU Gaodan.YI Qianhong.SUN Peilong
(College of Ocean,Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014 ,China)
Abstract： Polysaccharide component RFPF2A was isolated and purified from Ramaria flava and its
chemical structure and antioxidant activities were studied. RFPF2A was purified by ion-exchange chromatography on DEAE sepharose fast flow ion column and gel permeation over Sephacryl G-25 and S-400 High-resolution gel chromatography. By using infrared spectroscopy (IR), high performance liquid chromatography ( HPLC)，gas chromatography-mass spectrometer ( GC-MS) and nuclear magnetic resonance(NMR), the chemical structure of RFPF2A was studied. The in vitro antioxidant capacities of RFPF2A were evaluated by hydroxyl radical scavenging activity, superoxide anion radical scavenging activity，ferrous ions (FeJ ) chelating activity and total reducing power. The results showed that the RFPF2A had a molecular weight of 9. 87X102 kDa and it was composed of ^9-(l ,6)-D-glucopyranose, 〇-(l» 2,6)-D-galactopyranosine and^9-( 1,4)-D-mannopyranoside with a molar ratio of ^Kglucose) : ;?(galactose): mannose) = 1 : 0. 15 : 0. 26. When the mass concentration of polysaccharide was 5 mg/mL, the scavenging activity was 60% and 74. 47% for hydroxyl free radicals and superoxide anions, respectively； the chelation capacity of ferrous ions was 61. 82% and the absorbance of reducing power was 1. 506. These results suggested that RFPF2A had significant antioxidant activities in a concentration-dependent manner.
Keywords： Ramaria //am ； polysaccharide； structure determination； nuclear magnetic resonance；
antioxidant activity
收稿日期：2〇18-〇5-28
基金项目：浙江省科技计划项目（2018C02045)作者简介：何荣军（ 1978
),男，浙江龙泉人.副教授，研究方向为食品化学，E-mail: hrjun@zjut.edu.cn。
• 74 •浙江工业大学学报第48卷
珊瑚菌，泛指子实体直立，呈简单棒状、珊瑚状、 片状、角状、甚至猴头状的一类腐生或土生的真 菌隶属珊瑚菌科。珊瑚菌营养丰富，功能性物质 种类较多，具有较好的医用价值及保健功效[23]。研 究表明，从珊瑚菌子实体和菌丝体中得到的多糖具 有抗氧化活性[46]。目前，对于珊瑚菌的研究多限于 资源调查、鉴定分类、液体培养、大分子物质提取T 艺及化学成分的研究，关于珊瑚菌多糖纯化的研究 也有过报道[71°]。董芳等[11]采用热水浸提法提取珊 瑚菌多糖，经树脂脱色、醇沉、Sevage法脱蛋白、 DEAE-52柱层析和蒸馏水透析得到多糖RBP-1。
笔者采用水提醇沉法从珊瑚菌中提取粗多糖， 再经 DEAE sepharose fast flow 离子柱、Sephacryl G- 25和S-400 High-resolution凝胶柱进一步分离纯 化，得到均一多糖RFPF2A，此前关于该多糖组分 的研究还未见报道。采用红外光谱扫描（IR)、高效 液相色谱（HPLC)、气相色谱质谱联用（GC-MS)、 核磁共振（NMR)分析其结构及单糖组成。通过不 同的抗氧化试验方法测定了 RFPF2A的羟基自由 基清除能力、超氧阴离子清除能力、亚铁离子金属螯 合能力和总还原力，为珊瑚菌多糖用于保健食品和 医药产品的开发提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料与试剂
珊瑚菌子实体干品购于四川 省川珍实业有限公司；填料DEAE-sepharose fast flow.Sephacryl G-25 和 S-400 High-resolutuion 购 于美国GE公司；吩嗪硫酸钾脂（PMS)、还原型辅酶 (NADH)、氯化硝基四氮唑兰（NBT)、硫代巴比妥 酸（TBA)、菲咯嗉、脱氧核糖、葡聚糖、三氟乙酸 (TFA)和单糖标准品（L-鼠李糖（L-Rha)、L-阿拉伯 糖（L-Ara)、L-岩藻糖（EHFuc)、1>葡萄糖（I>Glc)、 1>木糖（D-Xyl)、D■半乳糖（CKial)、1>甘露糖（1> Man))购于美国Sigma-Aldrich化学试剂公司；其他 试剂均为国产分析纯。1.2主要仪器设备
高效液相色谱柱TSKgel G4000PWX1.,日本 T()S()H公司；傅里叶红夕卜光谱仪（Nicolet 6700)， Nicolet Continu fxm 红外显微系统，Thermo Electron 公司； AVANCE III 傅里 叶超导核磁共振波谱 仪，瑞士 Bruker 公司；XK 16 mm X 100 cm、XK 26 mm X 100 cm层析柱，美国GE公司；Finnigan Trace Ultra-DSQ II气相质谱联用仪.气相柱采用
TG-5MS 石英毛细管柱（30 mXO. 25 mmXO. 25 pm)，美国 Thermo Fisher 公司。1.3方法
1.3.1 珊瑚菌均一多糖RFPF2A的制备
取珊瑚菌子实体干品600 g，0. 45 mm过筛， 25 °C下用10倍体积的95%乙醇（体积分数）脱脂 12 h。脱脂后加人25倍蒸馏水，沸水提取2 h，过 滤，收集清液，再加入95%乙醇进行分级醇沉，冷冻 干燥后得到粗多糖RFPF30,上清液继续加人95%乙 醇至终体积分数达到60%,得到粗多糖RFPF60。采 用 DEAE sepharose fast flow 离子柱、Sephacryl 025 和S-400 High-resolution凝胶柱层析对RFPF60进行 分离纯化得到均一性多糖RFPF2A[w。1.3. 2 RFPF2A分子质量的测定
采用高效液相色谱法测定RFPF2A分子质 量‘13]。高效液相色谱系统：Water 1525.色谱柱 TSKgel G4000PWXL，示差检测器 Water 2414,以超 纯水为流动相，流速为1 mL/min.样品进样量为 1 ML,柱温（30. 〇±〇. D °c。
准确称取分子质量已知的T-系列Dextran标 准品（分子质量分别为1,5, 12,80, 150,270, 670 kDa)，将各标准品用超纯水溶解，配制成2 mg/mL 的标准品溶液.用0. 45 pm微孔滤膜过滤后进样。 以多糖标样的保留时间（min)为横坐标、以lgMu，为 纵坐标制作标准曲线图。1.3.3 单糖组成分析
采用气相色谱-质谱联用法分析RFPF2A组分 的单糖组成。根据何晋浙等[14]试验方法进行乙酰 化实验。乙酰化后的产物使用TraCe 1300/ISQ气 相-质谱联用色谱仪进行分析，检测器为氢火焰离子 检测器（FID).色谱柱采用TG-5MS石英毛细管柱 (30 mX0.25 mmXO. 25 fim),载气为高纯氮气，流 速为1.0 mL/min。温度程序设定为：初始温度120 °(：保持1111丨11，以10°(：/111丨11升温至 240 °(：,保持6.5 min。接口温度、离子源温度定为250 °C, 1.0 pL进 样，分流比1 : 30,质量扫描范围40〜500 amu,扫描 时间0. 28 s。
标准单糖样品乙酰化：精确称量等摩尔（2 mmol/L)单糖标品（I，Rha，L-Ara，L-Fuc, D~Glc, 〇■ Xyl，I>Gal，I>Man)分别溶于3 mL蒸馏水中，配制 成单糖的单标溶液；精确称量等摩尔（2 mm〇l/L)单 糖标品（L-Rha，L-Ara，I，Fuc，D-Glc，D~Xyl，I>Gal， I>Man)混合溶于3 mL蒸馏水中，配制成单糖的混 标溶液。加人适量硼氢化钠后密封并间歇振荡3 h， 后用冰醋酸中和过量的NaBH,。加人少量甲醇混
第1期
何荣军.等：珊瑚菌子实体多糖结构鉴定与抗氧化活性
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匀并减压蒸干，真空干燥器中静置24 h，110 °C烘箱 干燥15 min,后加人4. 0 mL醋野，100 °C下反应1 h。冷却至室温后加人甲苯，减压蒸干。用氯仿溶 解后加人等体积蒸馏水充分混匀，加人适量无水硫 酸钠干燥，过0.45 pm有机膜待GC-MS分析。
样品乙酰化：2 mg样品用TFA(2 mol/mL， 4 mL)110 °C水解2 h,用甲醇夹带旋干TFA，加人 30 mg NaBH,，后续与标准单糖乙酰化步骤相同。
样品甲基化:2 mg多糖样品溶于0.5 mLDMSO NADH 的 Tris-HCl 1 mL,含 45 Mmol/L PMS 的 Tris-HC1 1 mL，含 108 ,_tmol/L NBT 的 Tris-HCl1 mL。在25 °C水浴条件下恒温反应5 min，测定 560 nm处的吸光度。按照上述式（1)计算超氧自由 基清除能力。
1.4.3 亚铁离子金属螯合能力测定
参考Gao等[1«的方法测定。lmL不同质量浓 度的样品（〇〜5.0 mg/mL)与3. 7 mL甲醇，0. 1 mL2 mmol/L FeCl2 混合，加入 〇• 2 mL 5 mmol/L 的 中，加人 〇. 6 mL NaOH-DMSO (0• 025 g/mL)和 0.6 mL碘甲烷进行甲基化反应[15]。1.3.4 红外光谱分析
称取2 mg多糖纯品，放人真空干燥器中过夜 以除去多余水分，用溴化钾压片后进行红外光谱扫 描，扫描波长范围选择400〜4 000 cm一1。1.3. 5 核磁共振分析
称量多糖样品30 mg,用0. 5 mL重水（D20)溶 解，重复冻干，D2()复溶3次，采用500 MHz核磁共 振仪测定，25 °C 'H NMR用HIX)谷为内标，13C NMR的化学位移用饱和3-三甲基硅丙烷磺酸钠的 重水溶液（d2o+dss)为外标_
。
1.4抗氧化实验
1.4.1 羟基自由基清除能力
参照Chen等[17]的方法测定。样品溶解于蒸馏 水中使样品质量浓度为〇〜5. 〇 mg/mL，0. 2 mo^L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，2. 67 mmol/L脱氧 核糖和0. 13 mmoVL EDTA混合配成反应缓冲溶 液。取0.1 mL样品溶液与0.6 mL反应缓冲液混 合，依次添加〇. 2 mL 0. 4 mmol/L的亚铁硫酸铵， 0. 05 mL 2. 0 mmol/L 的抗坏血酸以及 0. 05 mL 20 mmol/L的H202。反应体系在37 °C下反应15 min。然后向混合物中加入1 mL 10 gA.的TBA， 1 mL 20 g/L的TCA。涡旋振荡后，沸水浴15 min， 然后在冰水浴中冷却。在532 nm处测定其吸光 度。抗氧化活性（AA)用羟基自由基清除能力表示， 其计算公式为
AA= (1— 今
X100% (1)
'
A空白7
式中：表示被测样品的吸光度；
表示以去离
子水代替样品的空白吸光度。1.4.2 超氧自由基清除能力
参考_^£1等[18]的方法测定。将样品溶于蒸馏水 中使样品质量浓度为〇〜5. 0 mg/mL，配制 16 mmol/L，pH 8. 0 的 Tris-HCl，分别取 0• 1 mL 各质量浓度的样品溶液，依次加入含557 pmol/L
菲洛嗉触发反应，室温下高速振荡10 min，在562 run处测定吸光度。吸光度越低表示螯合能力越 强。按照上述式（1)计算亚铁离子螯合能力。1. 4. 4 还原力测定
参照吴振等[2°]的方法测定。配制质量浓度为 0〜5. Omg/mL的样品。分别取2. 5mL样品，加人2. 5 mL pH值为6. 6,浓度为0. 2 m〇VL的磷酸盐 缓冲液，2. 5 mL 10 g/L的K3Fe(CN)6，混合后在 50 °C 下水浴 20 min。加人 2. 5 mL 100 g/L 的 TCA终止反应，离心10 min，取上清液加5 mL水 和1.2 mL 1 g/L的FeCl3，振荡混匀，在700 nm处 测定吸光度。
2结果与分析
2. 1 RFPF2A结构分析
2.1.1 RFPF2A相对分子质量的测定
RFPF2A的高效液相色谱图如图1所示， RFPF2A的洗脱谱图呈对称峰，由此判断其为均一 组分的多糖。通过峰面积计算表明多糖的纯度达到 90%以上，RFPF2A保留时间为6. 582 min,根据保 留时间计算得到分子量为9. 87X 102 kDa。
AIAlf/i
^yH5
6
7
8 9 10
保留时间/min
图1
RFPF2A的HPLC曲线
Fig. 1 Curve of RFPF2A with HPLC
2.1.2 RFPF2A单糖组成分析
7种单糖混标的GC-MS谱图如图2所示，由表 1和图2确定混标中各单糖的出峰顺序依次为L-鼠
• 76 •浙江工业大学学报第48卷
李糖、L-阿拉伯糖、L-岩藻糖、D-木糖、D■甘露糖、1> 葡萄糖和D■半乳糖。表1中的RSD,为6次重复试 验的相对标准偏差值.RSD2为6次平行试验的相 对标准偏差值，两个相对标准偏差RSI〕，和RSD2 均小于5%,说明本实验采用的乙酰化方法可操作 性较好，可用于后续实验分析。
RFPF27
3B排1約谱 I卜
sh «.另外主要含有I> 比
树为
ooo.l5甘露糖，其摩 脂 1.s脱
s¥'通过热水浸違 色、分 量
RBF2白其
均一多糖组: 糖 JBl,tt露714
6!{由鼠李糖、岩 U54. 53• o 糖组成，其肩
J
图及各个峰4
图
2H可# 知的>: 蛋 。料JD5貧6
9
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7为15
«糖 ,«
：糖1*9
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.FFFFPF2ARLIf1D-i筝P
l得11]r后.
5 主到半要 乳
a,
£70. 05 : 53. 8( 方法不同，从
听原
糖-
可能是因为®'料
_差组结
盼
£I
|
D和
源及提取性。
13.095
图2 混合标准品乙酰化衍生物的气质色谱图
■
13.015
Fig. 2
GC-MS of acetyl derivatives of complex standard monosaccharides
表1
混合标准品气相色谱结果及分析
Table 1 Results and analysis of the monosaccharides in standard sample
- 12.5
'
13.0
\\
13.166
,
13.5
保留时间/min
标准样品 名称
保留时 间/min
RSD,/%rsd2/%0. 741. 001.061. 261. 251. 331. 35
0. 991.051. 772. 221.072. 110. 53
质量分数/%
响应因子
图3RFPF2A的乙酰化衍生物的气质谱图 1he GC-MS spectrum of acetyl derivatives
Fig. 3
L-鼠李糖L-阿拉伯糖L-岩藻糖1>木糖1>甘露糖1>葡萄糖1>半乳糖
10.65210. 74910. 78110.95813.01813.10313. 173
8. 2612. 959. 1413. 0916. 3123. 3915. 15
表2
0. 630. 990. 701. 001.251. 791. 16
from RFPF2A
2.1.3 RFI3F2A甲基化分析
表2显: 示的是RFPF2A甲基化单糖以及单糖 连接位点。多糖经两次酸水解的甲基化之后，部分
成为甲基化糖醇乙酸酯。由甲基化分析
得出RFPF2A的糖残基是由2,3,6-三- 的最终结果: 露糖，3,4-二-()-甲基化半乳糖和2,3,4- ()-甲基化甘
三“)-甲基仙:葡萄糖组成。
RFPF2A的甲基化分析结果
Table 2
保留时间/min
甲基化单糖
Results of methylation analysis of RFPF2A
连接位点
摩尔比
主要特征离子峰m/z
9. 71110. 98913.080
2,3 *6-Me3-Man/)2，3，4-Me:、-Glc/?3 »4-Me2_Galp
1，4-linked Man/)1, 6-linked G\\cp1,2, 6-linked Galp
0. 281. 000. 32
59-71,87,101，113,117,129,145,161,20558,71，87,99,101,117,129,161，189,23369，85,98,115,128,139,145,157,170,187,217
2.1.4 红外光谱分析
红外光谱能够测定分子间的伸缩振动及不同 原子之间的极性键，可以用来分析多糖中的单糖 种类、糖苷键和功能团。由图4可清晰看到：在 3 422 cm 1处有明显的宽广的吸收峰，它是多糖的 ()一 H伸缩振动峰2124];在2 928 cm 1处有吸收 峰，它是C一H键的伸缩振动峰25];在1 608 cm 1处 为酰胺键的C =()伸缩振动吸收峰，表明RFPF2A中
含有酰基；在1 399 cm 1处为C—H变角振动吸 收峰；在1 730 cm 1和1 259 cm1处没有出现吸 收峰，表明RFPF2A不含糖醛酸051 cm 1 处的吸收峰为C'_ ()伸缩振动特征峰，包括吡喃 糖环的C--()一C伸缩振动峰和吡喃环中与羟基 连接的C一O伸缩振动峰；617 cm 1处为吡喃糖 骨架对称收缩振动吸收峰.与董芳等[〜的研究结 果相似。
第1期
c C,J
何荣军，等：珊瑚菌子实体多糖结构鉴定与抗氧化活性
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型和重复结构单元中单糖数目的一种分析方 法[27—28]。图 5(a)为 RFPF2A 25 t 的1 H NMR 谱， 从图中可知：RFPF2A在异头氢区的共振区域主要 有一个异头氢的共振峰，且裂分为8 = 4. 48和谷= 4. 50的两个峰，在5=4. 69处有一个强的HDO的 共振峰.为了避免强HDO峰掩盖部分异头氢的信 号，采用图5(b)60 °C的1 H NMR谱与其进行比较。 比较图5(a)和图5(b),发现主要有一个异头氢5 =4. 53的共振峰.此外还有含量很低的两个小振动
Fig. 4
IR spectra of RFPF2A
c
c - y /c. i
j•
峰，此外还可以发现无氧甲基信号，主要的残基C 裂分为两个峰，且J,.2约为8 Hz.说明其为■吡喃葡 萄糖构型，与红外光谱分析结果相符。
4.70m
Vl
5 核磁共振分析
NMR是主要用于解释多糖结构中糖苷键的构
.694
osoo寸lor)
.w \\寸 /
T
5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.07.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0
S
(a) RFPF2A的1H NMR图谱(25 t：)
(5
(b) RFPF2A的1H NMR图谱(60 t)
图5 RFPF2A 的1 H NMR 图谱 H NMR spectra of RFPF2A
Fig. 5
糖的异头碳信号在8为100. 71〜104. 26区域. 参考13C NMR谱图6(a)可知，在3=105. 79处有一 明显异头碳，另外两异头碳不明显。13C NMR谱上谷 为82〜88处无共振信号，说明糖残基为吡喃型糖
苷。从13C NMR谱的DEPT-135谱图6(b)可知：在 5=71.64处出现反峰，说明该组分含六位取代的残 基，而!^=63. 45处负峰为六位未取代的碳信号，结 果与甲基化分析结果相符。
Tf
\\q
in
寸■
110 105 100 9590
S
8580 75 70 65110 105 100 95
⑷
908580 75 70 65 60
(a) RFPF2A的\"C-NMR图谱(25 t) 阁谱(nC-DEPT-135 谱）
图6 RFPF2A 的13C-NMR 图谱 ,3C-NMR spectra of RFPF2A
Fig. 6
2.2 RFPF2A抗氧化活性2.2. 1
羟基自由基清除能力
生反应，对于筛选、评价具有清除自由基能力的功能 食品有着重要意义。RFPF2A的羟基自由基清除能力如图7所示，由图7可知：RFPF2A具有一定的 清除羟基自由基的能力，且随着质量浓度的增加而
羟基自由基是活性氧中最活泼的自由基，也是 毒性最大的自由基.几乎能与活细胞中任何分子发
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增加。王丽娟等[4]以珊瑚菌为原料，研究了珊瑚菌 多糖的提取及其对羟自由基的清除作用，发现当粗 多糖的质量浓度为5 mg/mL时，羟基自由基清除能 力可达到60%以上，说明经本实验分离纯化后的珊 瑚菌多糖RFPF2A清除羟基自由基的能力明显高 于同质量浓度的珊瑚菌粗多糖，有着较好的羟基自 由基清除能力。
图7 KFPF2A对羟基自由基的清除能力
Fig. 7 Hydroxyl radical scavenging ability of RFPF2A
2.2.2 超氧阴离子清除能力
在细胞的氧化反应中，通常首先形成的是超氧自 由基，当产生其他类型的细胞损坏自由基和氧化物质 时，其对细胞的破坏效果更大。加入抗氧化剂会引起 吸光度值的下降，表明混合物中的超氧阴离子自由基 被消耗。RFPF2A的超氧阴离子清除能力如图8所 示，实验表明：随着样品质量浓度的增加，RFPF2A对 超氧阴离子的清除能力也随之加强。在低质量浓度 时Vc的清除能力明显优于RFPF2A，当质量浓度为 2. 5 mg/mL时，RFPF2A对超氧阴离子自由基的清除 率为51. 6%,高于相同质量浓度的米胚多糖对超氧阴 离子自由基的清除能力[29]。当质量浓度达到5 mg/ mL时RFPF2A的清除能力达到74. 47%,说明 RFPF2A的超氧阴离子清除能力较好。
图8
KFPF2A对超氧阴离子的清除能力Fig. 8 The ability of RFPF2A to remove superoxide anions2.2.3 亚铁离子金属螯合能力
铁离子在生物体内能够引发脂质过氧化，并导 致羟基自由基的产生，因此铁离子鳌合能力也是一 个重要的评价抗氧化能力的指标。RFPF2A的亚 铁离子金属螯合能力如图9所示，随着质量浓度的 增加，RFPF2A对金属的螯合能力逐渐加强；当
RFPF2A达到最高质量浓度5 mg/mL时，它的螯合
能力达到61. 82%,高于同质量浓度蛹虫草多糖的 螯合能力[3°]，说明RFPF2A具有较好的亚铁离子 螯合能力。
图9
KFPF2A的金属螯合能力
Fig. 9
Metal chelation capabilities of RFPF2A
2. 2.4 还原力
化合物的还原力可作为化合物具有潜在抗氧化 活性的重要指标。RFPF2A的还原力如图10所 示，结果显示：RFPF2A具有较强的还原力作用，且 还原力与多糖质量浓度呈正相关，随着质量浓度的 上升RFPF2A还原力作用增强。当RFPF2A质量 浓度为2 mg/mL时，其还原力吸光值达到1. 106, 明显大于同质量浓度下虎斑乌贼肌肉多糖的还原力 吸光值[31];且当RFPF2A质量浓度为5 mg/mL 时，其还原力吸光值达到1.506,基本与Vc相同。
质量浓度/(mg • ml/1)
图10 RFPF2A的还原力
Fig. 10 Reducing power of RFPF2A
第1期
何荣军，等：珊瑚菌子实体多糖结构鉴定与抗氧化活性
3结论
通过水提醇沉法提取RFPF60组分，再经
DEAE-sepharose fast flow 离子柱、Sephacryl G-25 和S-400 High-resolution凝胶柱层析进一步分离纯 化得均一多糖组分RFPF2A;通过HPLC得RF- PF2A平均分子质量为9. 87X 102 kDa;乙酰化结果 得出RFPF2A多糖由D-葡萄糖、D-半乳糖和D-甘 露糖组成，其摩尔比为1 : 0.15 : 0.26;甲基化分析 RFPF2A主要由1，6连接的葡萄糖构成，此外还有 少量1，4连接的甘露糖和少量1，2,6连接的半乳 糖；由核磁共振分析得出，葡萄糖为斤吡喃构型，半 乳糖是cr构型，甘露糖是丨构型。另外通过不同种 类的抗氧化实验证明了均一多糖RFPF2A具有一 定的抗氧化活性，并且抗氧化活性与其质量浓度呈 正相关。本研究为珊瑚菌作为潜在功能性食品原辅 料提供科学依据，关于珊瑚菌活性与结构的对应关 系，还有待后续进一步研究，从而能够更加科学合理 地开发利用珊瑚菌资源。参考文献：
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(责任编辑：朱小惠）
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