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指南与共识・
2016年CLSIM100S(第26版)主要更新内容解读
张雅薇 王辉
建立和完善病原菌鉴定和体外药敏试验的标准化操作规程,是加强微生物室能力建设的基本要求之一。其对优化临床药物选择、减缓耐药菌的产生具有重要意义。CLSI制定的药敏试验标准是我国实验室遵循的指导性文件。作为CLSI批准的药敏试验标准(包括M02-A12、M07-A10和M11-A8)的补充文件,2016年M100-S26正式更名为M100S(第26版)。本文将重点解读CLSIM100S(第26版)文[1]
件中的主要更新内容,以供临床实验室参考。
一、常规试验及报告药物的更新
CLSIM100S(第26版)文件新增了多种目前新上市的新药如ceftolozane-他唑巴坦、奥利万星、泰地唑胺和特拉万星作为临床选择性报告的药物,并修订了几种抗菌药物的临床药敏报告组别,见表1。
二、药敏折点的相关更新
2016年CLSIM100S(第26版)文件修订了头孢唑林对肠杆菌科的纸片法和MIC折点,并建议将头孢唑林药敏结果用于预测口服头孢菌素的药敏。当头孢唑林用于治疗由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌引起的非复杂性尿路感染时,建议使用新修订的折点,见表2,折点建立基于的给药方案为1g每12h;除非复杂性尿路感染外,当患者为其他感染时,仍沿用M100-S25中头孢唑林对肠杆菌科的折点。
新版标准删除了下列药物对各菌种的折点:替卡西林和头孢噻吩对肠杆菌科的折点;替卡西林对铜绿假单胞菌;替卡西林和美洛西林对不动杆菌属;美洛西林、替卡西林和氨苄西林对其他非肠杆菌科(包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌,除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克
M100-S25[2]
- - - - - - -
洛美沙星、氧氟沙星、
泰利霉素
表1 M100-S25和M100S(第26版)推荐进行药敏试验及报告药敏结果的抗菌药物变化
细菌
肠杆菌科铜绿假单胞菌葡萄球菌属肠球菌属不动杆菌属洋葱伯克霍尔德菌嗜麦芽窄食单胞菌
流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌β溶血链球菌草绿色链球菌其他非肠杆菌科淋病奈瑟菌肺炎链球菌厌氧菌
f
- - - - - - - - -
A组a哌拉西林、替卡西林-克拉维酸哌拉西林-他唑巴坦 - -
哌拉西林、替卡西林-克拉维酸、四环素替卡西林-克拉维酸、左氧氟沙星、美罗
培南、氯霉素替卡西林-克拉维酸、氯霉素氯霉素 - -
替卡西林-克拉维酸 -
氧氟沙星、泰利霉素
B组bC组c洛美沙星、氧氟沙星洛美沙星、氧氟沙星洛美沙星、氧氟沙星 - - - - -
U组d哌拉西林
氧氟沙星、喹奴普丁-
-
达福普汀 - -奇霉素 -哌拉西林
- -
洛美沙星、氧氟沙星 -
哌拉西林 - -
替卡西林-
-
克拉维酸
DOI:10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.03.005作者单位:100044北京大学人民医院检验科通信作者:王辉,电子信箱:whuibj@163.com
・166・续表1
细菌
肠杆菌科
中华检验医学杂志2016年3月第39卷第3期 ChinJLabMed,March2016,Vol畅39,No畅3 -
A组Ceftolozane-他唑巴坦
B组M100S(第26版)[1]
-
C组 -
U组哌拉西林、替卡西
林-克拉维酸、洛美沙星、氧氟沙星哌拉西林、洛美沙星、氧氟沙星洛美沙星、氧氟沙星 -
哌拉西林、替卡西林-克拉维酸替卡西林-克拉维酸替卡西林-克拉维酸洛美沙星、氧氟沙星、泰利霉素氧氟沙星、喹奴普丁-达福普汀 -
哌拉西林、替卡西林/克拉维酸、洛美沙星、氧氟沙星奇霉素
O组e铜绿假单胞菌葡萄球菌属肠球菌属不动杆菌属洋葱伯克霍尔德菌嗜麦芽窄食单胞菌
流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌β溶血性链球菌草绿色链球菌其他非肠杆菌科f淋病奈瑟菌
哌拉西林-他唑巴坦 - - -
Ceftolozane-他唑巴坦奥利万星、泰地唑
胺、特拉万星奥利万星、泰地唑胺、特拉万星 -
- - - -氯霉素氯霉素氯霉素
奥利万星、泰地唑胺、特拉万星Ceftolozane-他唑巴坦奥利万星、泰地唑胺、特拉万星 -
- - -四环素 - - - - - -
左氧氟沙星、美罗培南 - - - - - -
- - - - -
- - -
肺炎链球菌厌氧菌
- -
- -
- -
- -
氧氟沙星、泰利霉素哌拉西林、替卡西林-克拉维酸
注:aA组:常规测试并报告的药物。bB组:常规测试,但选择性报告的药物。cC组:补充性抗菌药物,选择性地报告。dU组:仅用于泌尿道感染的抗菌药物。eO组:其他药物,是指对微生物有作用,但在美国不常规要求测试的药物。f其他非肠杆菌科:包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌(除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌);“-”表示无更新
表2 M100S(第26版)新增的MIC和纸片法折点
细菌
肠杆菌科
铜绿假单胞菌
假中间葡萄球菌mecA介导的耐药
金黄色葡萄球菌 (包括MRSA)
检测/报告组
UACC
万古霉素敏感的粪肠球菌粪肠球菌β溶血链球菌
化脓链球菌和无乳链球菌草绿色链球菌
BCCBCCCCCCCBB
抗菌药物
纸片含量
(μg)
301-303030------30---
纸片法(mm)
敏感≥15≥21≥18-≥15----≥15--≥15--≥15-
中介-17~20---------------
耐药≤14≤16≤17--------------
敏感≤2/4≤4/4≤0.25≤0.12≤0.12≤0.12≤0.25≤0.5≤0.25≤0.12≤0.5≤0.25≤0.06≤0.25≤8/4≤0.5≤16
MIC法(mg/L)中介4/48/4--1-------16/4----
耐药≥8/4≥16/4≥0.5-≥2-------≥32/4---≥32
Ceftolozane-他唑巴坦头孢唑林
Ceftolozane-他唑巴坦苯唑西林a奥利万星特拉万星泰地唑胺奥利万星特拉万星泰地唑胺奥利万星特拉万星泰地唑胺
Ceftolozane-他唑巴坦奥利万星特拉万星泰地唑胺
30/10
咽峡炎链球菌群
注:a头孢西丁的MIC或纸片法药敏均无法检测假中间葡萄球菌中mecA介导的耐药株;“-”表示无此值
中华检验医学杂志2016年3月第39卷第3期 ChinJLabMed,March2016,Vol畅39,No畅3・167・
霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)的折点。同时也删除了美洛西林和替卡西林对厌氧菌的折点。
三、常规药敏试验、补充药敏试验、初筛试验、替代药物检测法和等效药物检测法鉴定抗菌药物的敏感和耐药
M100S(第26版)增加了常规药敏试验、补充药敏试验、初筛试验、替代药物检测法和等效药物检测法的说明,见表3~7。
1畅常规药敏试验:用于临床常规检测的纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法。
2畅补充(非常规)药敏试验:通过常规纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法以外的方法检测某种或某类药物的敏感性或耐药性,且该方法无需额外试验确证药物的敏感性或耐药性。
3畅初筛药敏试验:结果用于预测,需要额外的
5畅等效药物检测法:可预测与其密切相关的同类药物的药敏结果,并通过减少多种密切相关药物的药敏检测数量以提高检测效率。
四、福氏志贺菌和宋内志贺菌的流行病学临界值(epidemiologicalcut-off,ECV)
流行病学临界值是CLSIM100-S25引入的新概念,指根据体外药敏表型(MIC值)来区分有无获得性和(或)突变耐药细菌,该MIC值即为ECVs。2016年新增了阿奇霉素对福氏志贺菌和宋内志贺菌的ECVs。当阿奇霉素抑菌圈直径≥16mm或MIC≤8mg/L时,可以推断福氏志贺菌为野生型;当阿奇霉素抑菌圈直径≤15mm或MIC≥16mg/L时,则该福氏志贺菌为非野生型。此外,阿奇霉素对宋内志贺菌野生型和非野生型的流行病学临界值分别为MIC≤16mg/L和MIC≥32mg/L。五、关于药敏质控的相关更新
2016年文件新增和修订了下列药物对部分质控菌株纸片扩散法和MIC法的质控范围,包括氨曲南-阿维巴坦、Delafloxacin、Gepotidacin、
试验确证药物的敏感性或耐药性。
4畅替代药物检测法:当目标抗菌药物的药敏无法检测或替代药物的药敏操作优于目标抗菌药物时,该药物可替代目标抗菌药物进行药敏试验。
表3 必需补充的药敏试验
补充药敏试验诱导克林霉素耐药
细菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、β溶血链球菌凝固酶阴性葡萄球菌金黄色葡萄球菌
试验方法
通过微量肉汤或纸片扩散法同时检测克林霉素和红霉素药敏产色头孢菌素
产色头孢菌素;青霉素纸片扩散法抑菌圈边缘试验
应用条件
对于红霉素耐药和克林霉素敏感(或中介)的菌株,在报告其克林霉素敏感之前需要进行此试验青霉素检测为敏感的菌株青霉素检测为敏感的菌株
β内酰胺酶β内酰胺酶
表4 非必需的补充药敏试验
补充药敏试验ESBLMHTCarbaNP
MRSA筛选琼脂法
细菌
大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌肠杆菌科肠杆菌科金黄色葡萄球菌
试验方法
克拉维酸抑制试验检测ESBL(微量肉汤稀释法或纸片扩散法)生长增强试验检测碳青霉烯类水解显色试验检测碳青霉烯类水解琼脂稀释法;含4%NaCl和6mg/L苯唑西林的MHA
结果
对头孢菌素敏感性下降的菌株;结果显示是否产生ESBL对碳青霉烯类敏感性下降的菌株;结果显示是否产某些碳青霉烯酶
对碳青霉烯类敏感性下降的菌株;结果显示是否产某些碳青霉烯酶检测MRSA;建议采用头孢西丁替代药敏试验
注:ESBL:超广谱β内酰胺酶;MHT:改良Hodge试验;MRSA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
表5 初筛试验
初筛试验
万古霉素琼脂筛选法纸片扩散法检测HLAR
细菌
金黄色葡萄球菌、肠球菌属肠球菌属
试验方法
琼脂稀释法;含6mg/L万古霉素的BHI庆大霉素和链霉素的纸片扩散法
确证试验
如果初筛试验阳性,则检测万古霉素MIC进行确证如果初筛结果不确定,则采用微量肉汤稀释法、琼脂稀释法确证
注:BHI:脑心浸液;HLAR:高水平氨基糖苷类耐药
・168・中华检验医学杂志2016年3月第39卷第3期 ChinJLabMed,March2016,Vol畅39,No畅3表6 替代药物的药敏试验
替代药物头孢西丁头孢唑林
细菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌
(不用于假中间葡萄球菌)大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌
试验方法
微量肉汤稀释(仅用于金黄色葡萄球菌)或纸片扩散法微量肉汤稀释法或纸片扩散法
结果
预测mecA介导的苯唑西林耐药预测用于治疗非复杂性尿路感染的口服头孢克洛、头孢地尼、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢氨苄和氯碳头孢的药敏。头孢泊肟、头孢地尼和头孢呋辛可能需要单独检测,因为某些菌株可能对上述药物敏感但对头孢唑林耐药
预测氟喹诺酮类的敏感性是否降低预测氟喹诺酮类的敏感性是否降低如果苯唑西林抑菌圈直径≥20mm,预测青霉素敏感;如果苯唑西林抑菌圈直径≤19mm,则需检测青霉素的MIC细菌肠杆菌科 葡萄球菌属葡萄球菌属
结果
“或者”(仅需检测1种药物)a“或者”(仅需检测1种药物)a需在备注中列出
培氟沙星萘啶酸苯唑西林
沙门菌属沙门菌属肺炎链球菌
纸片扩散法
微量肉汤或纸片扩散法纸片扩散法
表7 等效药物的药敏试验
药物
头孢噻肟或头孢曲松阿奇霉素、克拉霉素或红霉素
青霉素敏感的葡萄球菌对其他β内酰胺类敏感,该β内酰胺类药物对葡萄球菌感染有临床疗效(包括青霉素酶不稳定型和青霉素酶稳定型药物);青霉素耐药的葡萄球菌对青霉素酶不稳定的青霉素类耐药氨苄西林敏感性试验结果应用于预测阿莫西林的抗菌活性
注:a两种药物几乎完全交叉敏感和交叉耐药,仅需检测1种药物的药敏
嗜血杆菌属需在备注中列出
表8 多种新药纸片扩散法的质控范围
质控菌株
大肠杆菌ATCC25922
抗菌药物
氨曲南-阿维巴坦DelafloxacinGepotidacin
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
纸片含量抑菌圈直径(μg)(mm)30/20
1010510201030/205103030/20
3030/20
30103030
201015510201055
32~3828~3518~2627~3332~4023~2926~3232~3924~3023173131~29~23~38~38
Levonadifloxacin和Lefamulin等,见表8~9。
六、关于药敏试验操作和结果读取的建议对于葡萄球菌属、肺炎链球菌、β溶血链球菌和
草绿色链球菌,当通过微量肉汤稀释法检测氯霉素、克林霉素、红霉素、利奈唑胺、泰地唑胺和四环素的MIC时,细菌拖尾生长可能造成结果误读。对于上述情况,CLSI建议读拖尾现象开始的最低浓度为其MIC值,应忽略细菌微量生长
[3]
LevonadifloxacinDelafloxacinGepotidacinLefamulinLevonadifloxacin氨曲南-阿维巴坦Delafloxacin
Levonadifloxacin氨曲南氨曲南-阿维巴坦氨曲南
氨曲南-阿维巴坦头孢噻肟头孢泊肟头孢他啶头孢曲松
。当培养基中含有
甲氧苄啶和磺胺时,拮抗剂可能使细菌微量生长,终点判读为80%抑制生长的药物浓度。此外,当通过微量肉汤稀释法检测氯霉素、红霉素、利奈唑胺、泰地唑胺和四环素对肠球菌的MIC时,CLSI建议将拖尾现象开始的最低浓度作为其MIC值,以避免拖尾现象影响判读终点。
Cadazolid、Delafloxacin、Gepotidacin、Lefamulin、Levonadifloxacin和塞克硝唑)的溶剂和稀释剂选择,以及新型复合制剂(阿米卡星-磷霉素、头孢吡肟-他唑巴坦和亚胺培南-relebactam)的制备方法。
七、其他主要更新菌,而CLSIM45文件
CLSIM100S(第26版)未包括部分不常见细
[4]
铜绿假单胞菌
ATCC27853
大肠埃希菌ATCC35218肺炎克雷伯菌 ATCC700603
10~1626179101622333328221924~32~25~16~18~24~28~41~43~36~28~27~31此外,M100S(第26版)新增了某些药物(包括
流感嗜血杆菌
ATCC49247
Delafloxacin
淋病奈瑟菌ATCC49226肺炎链球菌ATCC49619
Lefamulin
LevonadifloxacinSolithromycinDelafloxacinGepotidacinLefamulin
Levonadifloxacin40~51
提供了这些细菌药敏试验
的标准化方法,包括药物选择、结果解释和质控。新版M45文件新增了对气球菌属、孪生球菌属、乳球
中华检验医学杂志2016年3月第39卷第3期 ChinJLabMed,March2016,Vol畅39,No畅3・169・
表9 多种新药MIC法的质控范围
质控菌株抗菌药物MIC(mg/L)金黄色葡萄球菌 ATCC29213
阿米卡星 磷霉素-(5∶2)
0.5/0.2~4/1.6Cadazolid
头孢吡肟0.06~0.5
Delafloxacin-他唑巴坦Gepotidacin0.1001/8~4/8亚胺培南-0.12~0.~1008 relebactama0.008/4~0.03/4Lefamulin0.0.00806~~0.0.25
粪肠球菌Levonadifloxacin
03 ATCC29212
阿米卡星 磷霉素-(5∶2)32/12.8~128/51.2
CadazolidDelafloxacin亚胺培南0.0.01506~~0.0.2512 relebactam-0.5/4~2/4大肠埃希菌
ATCC25922
阿米卡星 (5∶2)-磷霉素0.25/0.1~2/0.8头孢吡肟-他唑巴坦0.03/8~0.12/8DelafloxacinGepotidacin
0.008亚胺培南-relebactam
0.06/14~~~40.03
0.25/4
铜绿假单胞菌
levonadifloxacin0.03~0.25 ATCC27853
阿米卡星 (5∶2)-磷霉素1/0.4~8/3.2头孢吡肟-他唑巴坦0.5/8~4/8Delafloxacin亚胺培南Levonadifloxacin
-relebactam
0.0.2512/4~~0.15
大肠埃希菌
0.5~4/4 ATCC35218亚胺培南-relebactam0.06/4~0.25/4肺炎克雷伯菌 ATCC700603头孢吡肟-他唑巴坦0.12/8~0.5/8流感嗜血杆菌 ATCC49247
阿米卡星 (5∶2)-磷霉素0.5/0.2~4/1.6头孢吡肟-他唑巴坦0.5/8~2/8
DelafloxacinGepotidacin0.000Lefamulin
0.25~0.Levonadifloxacin0.0080.25001
5~1~~0.206流感嗜血杆菌
ATCC49766亚胺培南-relebactam0.25/4~1/4肺炎链球菌 ATCC49619
阿米卡星 (5∶2)-磷霉素8/3.2~64/25.6头孢吡肟-他唑巴坦0.03/8~0.12/8DelafloxacinGepotidacin0.Lefamulin
0.004Levonadifloxacin
0.06~~0.0150.0612~0.~0.250.55淋病奈瑟菌
美罗培南0.03~0.25 ATCC49226阿奇霉素0.25~1脆弱类拟杆菌Solithromycin Eravacyclineb
0.0.03ATCC25285
06~~0.0.2525塞克硝唑
0.25~1
续表9
质控菌株抗菌药物MIC(mg/L)多形拟杆菌
ATCC29741
Eravacyclinec0.12~1塞克硝唑
0.5~2艰难梭菌
ATCC700057
Cadazolidd0.12~0.5Eravacyclinee0.06~0.25塞克硝唑
0.06~0.5缓慢艾格氏菌 ATCC43055
塞克硝唑
0.25~2
注:a一种复方的新药Relebactam。b该是一MIC种质控范围为琼脂稀释法结果新的酶抑制剂,亚胺培南-relebactam;微量肉汤稀是释法MIC质控范围为0畅015~0畅12mg/L。c该MIC质控范围为琼脂
稀释法结果;微量肉汤稀释法MIC质控范围为0畅06~0畅25mg/L。
d
该MIC质控范围为琼脂稀释法结果;微量肉汤稀释法MIC质控范
围为0畅06~0畅25mg/L。e该MIC质控范围为琼脂稀释法结果;微量肉汤稀释法MIC质控范围为0畅015~0畅06mg/L
菌属、微球菌属和胶胨罗斯菌的药敏试验。
此外,M100S(第26版)文件附录A(药敏结果确证与微生物鉴定)将奥利万星、特拉万星和泰地唑胺加入肠球菌属、金黄色葡萄球菌、β溶血链球菌和草绿色链球菌的耐药表型检测中。
附录B新增某些细菌对部分药物的天然耐药情况,包括肠杆菌科细菌对泰地唑胺、奥利万星和特拉万星,梭菌属对氨基糖苷类,无害梭菌对万古霉素和氨基糖苷类,拟杆菌属对氨基糖苷类、青霉素和氨苄西林,以及猫狗梭杆菌对氨基糖苷类和喹诺酮类天然耐药。同时删除了铜绿假单胞菌对磷霉素的天然耐药。
参
考
文
献
[1]ClinicalstandardsandLaboratoryStandardsInstitute畅M100S畅[2]editionClinical[S]畅forWayneantimicrobial,PA:CLSIsusceptibility,2016畅
testing:Performance
twenty-sixthPerformanceandLaboratoryStandardsInstitute畅M100-S25畅
twenty2015畅
-fifthinformationalstandardsforsupplementantimicrobial[S]畅susceptibilityWayne,PA:testingCLSI:,[3]ClinicaldilutionandLaboratoryStandardsInstitute畅M07-A10畅Methodsaerobicallyantimicrobial;approvedsusceptibilitystandard-tenthtestseditionfor[bacteriaS]畅Waynethat,growfor
PA[4]CLSIClinical畅
:antimicrobialandisolatedoffastidiousdilutionLaboratorybacteriaandStandardsdisk[SsusceptibilityInstitute]畅testing畅M45畅
ofMethodsinfrequentlyfor(Wayne收稿日期,PA:2016-:CLSI01-畅
10)
(本文编辑:武昱)
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