国际检验医学杂志２０１１年１１月第３２卷第ｌ９期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．】９ ・２２７５－ 周出现症状口］。早期先天性梅毒表现为肝脾肿大、皮疹（脓疱 疹、脱皮、斑丘疹）、黄疸、慢性鼻炎、贫血、脑膜炎、肠梗阻或出 血、间质性肺炎、肺脓肿、骨骼损害等［４ ］。 本组７Ｏ例母亲临床确诊梅毒阳性的新生儿中，７Ｏ例ＴＰ— （４）梅毒血清试验阳性。而先天性梅毒患儿出生时６６ 无临 床症状，取材查到梅毒螺旋体的阳性率也不高，所以梅毒血清 试验是先天性梅毒诊断的重要依据，而ＴＰ—ＩｇＭ抗体更是可靠 的检验指标［ 。 参考文献 ［１］陈涵强．新生儿先天性梅毒５２例［Ｊ］．实用儿科临床杂志，１９９９， １４（１）：２２ ２３． ＰＡ全部阳性，其中２６例ＴＲＵＳＴ阳性，ＴＰ ＩｇＭ阳性有１８例。 ＴＰＰＡ检测的是梅毒ＩｇＭ和ＩｇＧ的混合抗体，而血清中ＴＰ的 ＩｇＧ抗体，由于ＩｇＧ相对分子质量较小，可以通过胎盘，不能判 断患儿体内的ＴＰ ＩｇＧ究竟是来源于母体还是自身所产生。 因此，ＴＰＰＡ阳性的新生儿尚不能确诊感染梅毒。而ＴＲＵＳＴ 是检测梅毒的抗类脂抗原的抗体（反应素），主要是ＩｇＧ和ＩｇＭ ［２］Ｗａｌｋｅｒ ＤＧ，Ｗａｌｋｅｒ ＯＪ．Ｆｏｒｇｏｔｔｅｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｇｏｎｅ：ｔｈｅ ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ ｓｃｏｕｒｇｅ ｏｆ ｃ０ｎｇｅｎｉｔａｌｓｙｐｈ ｌｉｓ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００２，２（７）： ４３２－４３６． 型混合抗体，反应素亦可通过胎盘到胎儿血中，如胎儿末感染， 出生３～４个月后可自动转阴，如果滴度不减或反而上升，或高 Ｅ３］Ｈｏｌｌｉｅｒ ＬＭ，Ｃｏｘ ＳＭ．ＳｙｐｈｉｌｉｓＥＪ￣．Ｓｅｍｉｎ Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ，１９９８，２２（４）： ３２３ ３３１． 于母体的４倍以上，即可诊断为先天性梅毒，所以ＴＲＵＳＴ有 助于鉴别先天性梅毒。ＩｇＭ抗体是梅毒感染最早期产生的抗 体，由于ＩｇＭ相对分子质量大，母体产生的ＩｇＭ不能通过胎 ［４］Ａｊａｙｉ ＮＡ，Ｍａｒｖｅｎ Ｓ，Ｋａｓｃｈｕｌａ ＲＯ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｕｌｃｅｒａｔｉｏｎ，ｏｂ— ｓｔｒｕｅ ｔｉｏｎ，ａｎｄ ｈａｅｍｏｒｒ ｈａｇｅｉｎ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｐｈｉｌｉｓ［Ｊ￣．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｕｒｇ Ｉｎｔ，１ ９９９，１５（６）：３９１ ３９３． 盘，故如新生儿体内检测到ＴＰ—ＩｇＭ抗体，则可诊断其为先天 性梅毒，所以ＴＰ—ＩｇＭ抗体成为新生儿先天性梅毒的诊断和判 断疗效的可靠方法。 先天性梅毒是一种可预防的疾病，积极的产前检查及孕期 梅毒治疗是预防先天性梅毒的重要措施。大约４Ｏ 未经治疗 的初期或２期梅毒孕妇流产或婴儿在围生期死亡 。先天性 ７５］Ｂｅｌｌ ｃ，Ｔａｘｙ Ｊ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｂｓｃｅｓｓｅｓｉｎ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｐｈｉｌｉｓ［Ｊ］． Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏ １Ｉ ａｂ Ｍｅｄ，２００２，１２６（４）：４８４—４８６． Ｅ６］Ｍｏｂｌｅｙ ＪＡ，ＭｅＫｅｏｗｎ ＲＥ，Ｊａｃｋｓｏｎ ＫＬ，ｅｔ ａ１．Ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒｃｏｎ— ｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｐｈｉｌ ｎｉｎｆａｎｔｓ ｏｆ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｓｙｐｈｉｌｉｓｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，１９９８，８８（４）：５９７—６０２． 梅毒诊断依据：（１）家族史及其母体患梅毒；（２）典型损害和体 征；（３）从损害、鼻分泌物或胎盘脐带上取材查到梅毒螺旋体； ・（收稿日期：２０１１－０６ １１） 经验交流・ ＴＰＰＡ、ＴＰ—ＥＬＩＳＡ、ＴＲＵＳＴ试验在梅毒诊治中的联合应用 周先军 （四川金域医学检验中心，成都６１００８１） 摘要：目的探讨梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验（ＴＰＰＡ）、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（ＴＰ ＥＬＩＳＡ）、梅毒甲苯 胺红不加热血清试验（ＴＲＵＳＴ）在梅毒检测诊断中的联合应用及在疗效观察中的作用。方法 采用ＴＰＰＡ、ＴＰ－ＥＩ ＩＳＡ、ＴＲＵＳＴ 检测６５０例患者血清，其中术前检查患者血清１９８例，临床确诊梅毒患者４５２例。另对其中２９例梅毒患者进行治疗前后试验检 测跟踪，并对结果进行统计、比较、分析。结果 在４５２例临床诊断为梅毒的患者中，ＴＰＰＡ试验全部阳性；ＴＰ－ＥＬＩＳＡ试验阳性 ４５０例，假阴性２例；ＴＲＵＳＴ试验阳性２０８例。在术前检查患者中ＴＰＰＡ假阳性ｌ倒，ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ试验假阳性ｌ例，ＴＲＵＳＴ试验 存在部分假阳性结果。２９例梅毒患者治疗后，ＴＲＵＳＴ滴度下降或转阴者２３例，上升３例，无变化者３例，而ＴＰＰＡ、ＴＰ Ｅｌ ＩＳＡ 治疗前后均为阳性。结论项指标。 ＴＰＰＡ、ＴＰ—ＥＬＩＳＡ对疑为梅毒患者有确证作用，但不能单独作为诊断标准，而应结合临床综合判断， 对于梅毒高度怀疑患者，而ＴＰ—ＥＬＩＳＡ试验阴性者应用ＴＰＰＡ复查。ＴＲＵＳＴ试验则可作为梅毒患者疗效观察及复发监测的一 关键词：梅毒； 毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验； 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验； 梅毒血清学试验甲苯胺红不加热 血清试验 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３Ｏ．２Ｏ¨．１９．Ｏ５６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：ｌ６７３ ４１３０（２０１１）ｌ９ ２２７５ ０３ 近年来我国梅毒的发病形势严峻，呈上升趋势。据报道 本富士瑞必欧株式会社生产，ＴＰ—ＥＬＩＳＡ试剂为上海科华生物 工程股份有限公司生产，ＴＲＵＳＴ为上海荣盛生物药业有限公 司生产，所有试剂均在有效期内使用。 １．３方法 所有试验均严格按照厂商说明书进行操作，每次 试验均设阴阳质控对照。 ２００９年，梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中居第３ 位［ 】。目前大多数医院检测梅毒常用的方法为梅毒甲苯胺红 不加热血清试验（ＴＲｕｓＴ）、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试 验（ＴＰ—ＥＬＩＳＡ）、毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验（ＴＰＰＡ）。 为更好、更快、更准确协助临床诊断、治疗梅毒，现将这３种方 法进行比较，现报道如下。 １资料与方法 １．３．１ ＴＰＰＡ试验 室温条件下，在ｕ形板上用稀释液将每 份血清样本稀释，加人致敏粒子或未致敏粒子，静置２ ｈ后观 察结果，加致敏粒子孔大于或等于１：８０为阳性。 １．３．２ ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ试验 在每孔加入待检样本、酶标试剂各 ５Ｏ Ｉ ，轻轻振荡混匀、封板，３７℃水浴３０ ｒａｉｎ，洗板５遍，扣 干。每孔加人显色剂Ａ、Ｂ液各５Ｏ“Ｌ，混匀、封板３７℃，１５ １．１一般资料对２００８年７月至２０１０年８月在该检验中心 进行梅毒检查的４５２例临床梅毒患者和１９８例术前检查患者 的检测结果进行统计分析。 １．２仪器与试剂上海热电ＭＫ３型酶标仪，ＴＰＰＡ试剂为日 ｍｉｎ再加５Ｏ Ｉ 终止液混匀比色，酶标仪波长４５０ ｎｍ，空白孔 国际检验医学杂志２０１１年１１月第３２卷第１９期Ｉｎｔ Ｊ Ｉａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３ №． 调零，读取吸光度（Ａ值），Ａ＜临界值为阴性，Ａ≥临界值为 阳性。 ３讨 论 近年来，我国梅毒报告病例数明显增加，流行呈快速上升 加５Ｏ Ｉ 待检血清在纸卡的圆圈 趋势，从１９９９￣２００９年发病率年均增长１４．３ ，可见我国梅 毒流行形势日益严峻，控制任务艰巨［１ 】。 ＴＲＵＳＴ既可进行定性也可进行半定量试验，定性试验主 １．３．３ ＴＲＵＳＴ定性试验内，用盒中的专用针头，垂直滴加ＴＲＵＳＴ试剂１滴，以１００ ｒ／ ａｒｉｎ离心８ ｍｉｎ后在显微镜下观察凝集情况，凝集为阳性。 ＴＲＵＳＴ半定量试验：对检测样本进行倍比稀释，按定性试验 方法进行检测，以最大稀释倍数凝集处作为最终滴度。 ２ 结 果 要用于Ｉ、Ⅱ期梅毒筛查。半定量试验主要用于疗效观察，通 过表５可以发现，ＴＲＵＳＴ滴度的变化可以较好反映出梅毒患 者的治疗效果，其在梅毒疗效观察中有重要作用。当ＴＲＵＳＴ 检测结果前后两次滴度上升４倍或以上时，可作为判定复发、 再感染的指标。但通过表４显示，其在梅毒不同感染时期，特 ２．１在４５２例临床确诊为梅毒患者（梅毒诊断参照１９９５年卫 生部防疫司颁布的梅毒诊断标准）中ＴＰＰＡ阳性４５２例，ＴＰ— ＥＬＩＳＡ阳性４５０例，ＴＲＵＳＴ阳性２０８例。ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ有２例 阴性，而ＴＰＰＡ检测结果为全部阳性，对该样本进行稀释，再 进行ＴＰ—ＥＬＩＳＡ检测，结果仍为阳性，证实为ｍ清中梅毒特异 性抗体过高而出现前带效应造成原倍血清ＴＰ—Ｅｌ ＩＳＡ试验为 阴性。ＴＰＰＡ阳性，ＴＲＵＳＴ阴性共２４４例，经与临床沟通，均 是既往梅毒感染者。１９８例术前检查患者，出现ＴＲＵＳＴ阳性 ５例，其中１例结肠癌患者术前检查ＴＰＰＡ、ＴＲＵＳＴ、ＴＰ ＥＬＩＳＡ同为阳性，而术后均为阴性样本，后结合临床证实为假 阳性样本。其余４例后经临床证实，排除梅毒患者。对其中 ２９例梅毒患者进行治疗前后跟踪检测分析，结果发现，治疗１ 个疗程后，ＴＲｕＳＴ滴度下降或转阴者２３例，无变化３例，滴 度升高３例。而ＴＰＰＡ、ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ测定结果治疗前后均为阳 性。见表１。 表１ ４５２例梅毒患者ＴＰＰＡ、ＴＰ—Ｅｌ ＩＳＡ、和 ＴＲＵＳＴ试验结果比较［ （ ）］ ２．２ ＴＰＰＡ、ＴＰ ＥＬＩＳＡ和ＴＲＵＳＴ试验的特异性和灵敏度比 较。见表２～５。 表２ ＴＰＰＡ试验灵敏度和特异性结果（”） 表３ ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ试验灵敏度和特异性结果（ｎ） 表５ ２９例梅毒患者治疗后ＴＲＵＳ３’滴度试验结果 别是Ⅲ期梅毒或潜伏期梅毒时灵敏度较低。在很多报道中也 指出ＴＲＵＳＴ等非特异性抗原试验因其是针对磷脂的抗体，在 某些传染病及胶原病时会出现假阳性反应 ３ 。 ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ是利用梅毒螺旋体基因工程混合抗原检测人 体内相应的梅毒螺旋体特异性抗体，其灵敏度、特异性均较高。 从表３可看出，灵敏度、特异性均能达到９９ 以上。但方法学 上的原因，当待检血清内抗体含量过高，会出现前带效应，造成 假阴性结果，影响临床判断。 ＴＰＰＡ可作为确认试验＿４］。虽然ＴＰＰＡ试验灵敏度、特异 性均较好，但用于半定量检测时，其操作比较繁琐，反应时间较 长，不利于快速检测。另因梅毒螺旋体特异性抗体在人体内存 在时间较长，降低速度慢，有的个体甚至会终身存在。所以建 议临床不用ＴＰＰＡ试验结果作为梅毒疗效观察指标。 综上所述，现在用于检测梅毒螺旋体的血清学方法较多。 各种检测方法各有其优缺点：（１）ＴＲＵＳＴ等非梅毒螺旋体抗 原试验操作简便，灵敏度特异性较低，且有假阳性结果，主要适 用于疗效观察，判定复发及再感染的监测。梅毒患者经足最规 则治疗后还应定期观察，包括全身体检及非梅毒螺旋体抗原血 清学试验（ＴＲＵＳＴ试验等），以了解是否治愈或复发。梅毒治 疗后第１年每３个月复查１次，以后每半年复查１次，连续２～ ３年。如血清反应由阴性转为阳性或滴定度升高四倍（如由 １：２升为１：８）属于血清复发，或有症状复发，均应ＪＪｌ１倍鼍复 治。超过２年血清不阴转者属于血清固定，如无ｌ临床症状复 发，是否再治疗，根据具体病情而定；无论再治疗与否－』】 作神 经系统检查及脑脊液检查，以便早期发现无症状神经梅毒 。 （２）ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ试验灵敏度、特异性均较好，但可能出现前带效 应造成假阴性结果，对于临床高度疑为梅毒患者而Ｔｆ）＿Ｅ１ ＩＳＡ 试验阴性者，应对血清样本稀释后再检测或采用ＴＰＰＡ试验 复检，稀释时可作梯度稀释，防止因抗体滴度过高而稀释倍数 不足带来的假阴性。（３）ＴＰＰＡ试验灵敏度、特异性都很好，ｆＨ 其操作比较繁琐，反应时间长，不便于快速检测。所以为提高 梅毒检出率，检验科最好使用两种以上的方法检测（非特异性 抗原试验与特异性抗原试验各一种）。另因试验方法及一些干 扰因素原因，梅毒血清学试验阳性结果，只提示所测标本中有 类脂抗体或抗梅毒螺旋体抗体存在，不能作为患者感染梅毒螺 旋体的绝对依据，阴性结果也不排除梅毒螺旋体感染 。所 有检测结果都应按照卫生部颁布的《梅毒诊断标准及处理原 则》并结合临床综合分析判断。 参考文献 ［１］ ｐ华人民共和国 生部．梅毒诊断标准及处理原则［Ｐ］．１９９５， ＧＢｌ５９７４． ［２］叶应妩，王毓三，申子瑜，等．全国临床检验操作规程［Ｍ一］．３版．南 京：东南大学出版社，２００６：６４７—６５０． ［３］杨屯新，曾劲峰，许晓绚，等．ｍ液筛查中梅毒实验方法适片】性探 讨［Ｊ］．国际检验医学杂志，２００６，２７（２）：ｌ１ ６ ｉ ２０． 国际检验医学杂志２０１１年１１月第３２卷第１９期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１９ ［４］黄永梅．ＴＰ—ＥＩ ＩＳＡ、ＴＰＰＡ和ＴＲＵＳＴ、ＲＰＲ梅毒检测方法的比 较［Ｊ］．国际医药卫生导报，２００６，Ｉ２（８）：８８—８９． 价值分析口］．临床和实验医学杂志，２００８，７（Ｉ）：５９—６０． ［８］石玉萍，李瑞莲，王淑春．梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验、梅毒螺 旋体被动颗粒凝集试验和快速血浆反应素试验３种试验方法的 ［５］郑春苏，黄湘宁，冯彩莲．ＴＲＵＳＴ滴度与ＴＰＰＡ联合检测在梅毒 诊断中的应用［Ｊ］．湘南学院学报：医学版，２００６，８（３）：６７—６８． 比较 ］．山西医药杂志，２００９，３８（４）：３７９—３８０． ［９］卫生部疾病预防控制中心．中国预防与控制梅毒规划（２０１０—２０２０ 年）Ｅｓ］．２Ｏ１０：５２． （收稿日期：２０１Ｏ一１０—０９） ［６］罗晓红，段朝晖，潘昆贻，等．甲苯胺红不加热血清试验和梅毒螺 旋体抗体明胶颗粒凝集试验在梅毒诊治中的应用［Ｊ］．中国自然 医学杂志，２００７，９（３）：２１ ９－２２１． Ｉ－７］沈洪远，余伟，吴敏霞．三种梅毒血清学试验在梅毒诊断中的应用 ・经验交流・ 某地区结直肠癌患者Ｋ—Ｒａｓ基因突变检测结果分析 杨蔚蔚 ，张玲 ，陈慧娟 ，程俊峰 ，胡春明 （广州金域医学检验中心：１．免疫室；２．分子病理室 ５１００３０） 摘 要：目的 探讨广东地区结直肠癌患者组织中Ｋ—Ｒａｓ基因突变模式，为临床治疗提供科学依据。方法 选取广东地区 的４Ｏ例结直肠癌患组织标本，应用聚合酶链反应以及测序法对患者Ｋ—Ｒａｓ基因进行检测，结果采用卡方检验进行统计学分析。 结果 在４ｏ例结直肠癌患者中发现４种Ｋ—Ｒａｓ基因突变类型，包括密码子１２位点ＧＧＴ—ＧＡＴ、ＧＧＴ—ＧＴＴ、ＧＧＴ—ＴＧＴ突变 以及１３位点的ＧＧＣ－－￣ＧＡＣ突变，Ｋ－Ｒａｓ基因突变率为３５．００ 。Ｋ—Ｒａｓ基因突变与年龄和性别无统计学意义。结论 广东地区 结直肠癌患者Ｋ Ｒａｓ基因突变率为３５．Ｏ０ （１４／４０）。密码子１２位点ＧＧＴ— ＧＡＴ是突变热点，占突变的９３ ，结直肠癌Ｋ—Ｒａｓ 基因突变与患者年龄及性别无关。 关键词：结直肠肿瘤； Ｋ—Ｒａｓ基因； 突变检测 Ｄ０Ｉ：ｉ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３Ｏ．２Ｏｌ１．１９．０５７ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７３—４１３Ｏ（２Ｏ１１）１９－２２７７—０２ 结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来发病率 呈上升趋势。结直肠的发生、发展是一个多阶段、多基因改变 的复杂的生物学过程，包括多个癌基因的激活和抑癌基因的失 活，研究表明，Ｋ—Ｒａｓ癌基因的激活与结直肠癌的发生、发展密 切相关，４Ｏ 的患者Ｋ—Ｒａｓ基因发生突变 ］。Ｋ—Ｒａｓ基因以点 表３。 表１ ４０例结直肠癌中发生突变的的百分率 突变为主，突变热点位于第２外显子的１２、１３密码子 。为探 讨广东地区结直肠癌中患者组织中Ｋ—Ｒａｓ基因突变模式以及 突变特点，现采用ＰＣＲ扩增加测序法对患者标本中Ｋ—Ｒａｓ基 表２ １４例结直肠癌患者Ｋ—Ｒａｓ基因各个位点的突变率 因突变情况进行分析，以期为临床治疗提供科学依据。 １资料与方法 １．１ 一般资料 收集广东地区各个医院送往金域检验中心的 结直肠癌患者的蜡块标本４Ｏ例。其中结肠癌２８例，直肠癌 １２例，男女性比例５：３；最大年龄７Ｏ岁，最小年龄２９岁，平均 年龄５８．５岁。每个蜡块均由病理医师检验，其中所含肿瘤组 织都超过５Ｏ 。 Ｉ．２检测方法 应用聚合酶链反应以及测序法对患者Ｋ—Ｒａｓ 基因进行检测。主要材料与试剂ＰＣＲ体系：２×Ｔａｑ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（＃ＫＴ２０１）购自Ｔｉａｎｇｅｎ公司；ＦＦＰＥ ＤＮＡ提取试 剂盒（ｃａｔ＃５６４０４）购自ＱＩＡＮＧＥＮ，１００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ 表３ ４０例结肠癌患者Ｋ～Ｒａｓ基因突变与年龄的关系 （ＤＩ １００）购自上海天为时代有限公司；ＴＢＥ等均参考《分子克 隆》附录部分配制；琼脂糖、胰酶、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙 酸、溴化乙啶等，主要购自Ｇｉｂｉｃｏ公司。ＰＣＲ产物采用直接测 ２．４ ４０例结肠癌患者中Ｋ Ｒａｓ基因突变与性别的关系 见 表４。 序列，由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司完成双向测序。 １．３统计学处理２结 果 采用Ｙ。检验进行统计。 表４ ４Ｏ例结肠癌患者中Ｋ Ｒａｓ基因突变与性别的关系 ２．１ ４０例结直肠癌中发生突变的的百分率 见表１。 ２．２ １４例结直肠癌患者Ｋ—Ｒａｓ基因各个位点的突变率 见 表２。 ２．３ ４０例结肠癌患者Ｋ—Ｒａｓ基因突变与年龄的关系 见
