RocheE170检测系统测定促甲状腺激素_TSH_分析灵敏度的验证

现代检验医学杂志　第22卷　第3期　2007年5月　JModLabMed　.22　No.3May.2007,Vol

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RocheE170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度的验证

郑　沁,黄亨建,张国福,张　林,郭　丹　(四川大学华西医院实验医学科,四川成都　610041)

摘　要:目的　对RocheE170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)项目的检测低限、功能灵敏度进行验证。方法　对空白样

品进行连续20d在天间重复性实验,验证TSH检测低限;制备系列低浓度的TSH样品,验证其功能灵敏度。结果　RocheE170检测系统测定TSH的最低检测限为01005ΛIU󰃗ml,与Roche厂家产品说明书声称的一致;其功能灵敏度该室验证值为01011ΛIU󰃗ml,与Roche厂家产品说明书声称有差异(01014ΛIU󰃗ml)。结论　实验室必须验证和建立本实验室条件的分析灵敏度,为甲状腺患者提供准确可靠的促甲状腺激素(TSH)低值结果。关键词:促甲状腺激素(TSH);检测低限;功能灵敏度

中图分类号:Q575+114　R392233　文献标识码:A　文章编号:167127414(2007)032058203

ValidationforAnalyticalSensitivityofThyrotropin(TSH)DetectedbyRocheE170System

ZHENGQin,HUANGHeng2jian,ZHANGGuo2fu,ZHANGLin,GUODan

(DepartmentofLaboratoryMedicine,WestChinaHospital,SichuanChengdu　610041,China)

Abstract:Objective　Tovalidatetheanalyticalsensitivity[lowerlimitofdetection(LLD)andfunctionalsensitivity(FS)]ofthyroidstimulatinghormore(TSH)detectedbyRocheE170system.Methods　Twodifferentkindsofsampleswereprepared.Onesamplewasa“blank”thathadazeroconcentrationofTSH.Thesecondwasa“spiked”samplethathadalowconcentrationofTSH.Boththeblankandspikedsamplesweremeasuredrepeatedly20timesday2to2dayinareplicationtype.Differentestiofexperiment,thenthemeansandSDswerecalculatedfromthevaluesobservedforthesamplesmatesof.ThevalidationoftheLLDwas“blank”samples;detectionlimitmaybecalculatedfromthedataonblankandspikedsamples

“spiked”samples.Results　TheLLDofTSHdetectedbyRocheE170systemwas01005thevalidationoftheFSwasthe

ΛIU󰃗ml,whichwasconsistentwiththevalueprovidedbyspecification;theFSofTSHdetectedbyRocheE170systemwas01011ΛIU󰃗ml,whichwaslessthanthevalue(01014ΛIU󰃗ml)providedbymanufactrureclaim.Conclusion　Thelaboratoryshouldvalidatetheanalyticalsensitivityinitsownersituation,toinsurethevaluesoflowconcentrationTSHreliably.Keywords:thyrotropin;lowerlimitofdetection;functionalsensitivity　　甲状腺疾病是目前内分泌疾病中最常见的一家学会(CAP)的要求,在实验室开始对患者标本进

类。该类疾病的发生没有固定的年龄段,在诊断方面,除了一些有明显体征的病人,甲状腺功能检测的结果是临床诊断与鉴别诊断的重要依据。促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormore,TSH)的检测相对于游离甲状腺素(freetyroxine,FT4)检测来说,对甲状腺功能紊乱更具有特异性。美国国家临床生物化学家协会(USNationalAssociationofClinicalBiochemists,NACB)在1995年提出以TSH检测为中心的策略评估甲状腺功能[1]:将TSH作为一线检测项目(Front2lineTest),根据TSH的检测结果是否异常,再检测游离甲状腺素(FT4)对甲状腺疾病鉴别诊断。TSH在血清中的含量很低,1990年Spencer等用电化学发光的方法测定

[2]

TSH,使其分析灵敏度达到0101mU󰃗L,同时低含量时功能灵敏度也明显提高,为临床提供了准确了解甲状腺功能状态和真正将甲状腺功能亢进与非甲状腺疾病(指肝脏、肾脏和心脏类的疾病)以及亚临床状态区分开的分析灵敏率。按照美国病理学

行检测、报告结果之前,应对引进的检测系统进行

必要的性能确认。本文对RocheE170检测系统测定TSH进行分析灵敏度(检测低限与功能灵敏度)的验证和评价。1　材料和方法

111　材料　RocheE170免疫测定检测系统,促甲状腺激素(TSH)电化学发光免疫测定试剂,校正品厂家为罗氏公司。

112　方法　采用双抗体夹心法原理。

11211　空白样品:将牛血清清蛋白干粉(BSA)配制成30g󰃗L的牛血清清蛋白(BSA)溶液。在该溶液中加入011g󰃗dl叠氮钠防腐。

11212　系列低浓度检测限样品:用空白样品液稀释Roche的TSH115ΛIU󰃗ml校准液(TSHCal2),配制一系列低浓度的TSH溶液。其TSH的理论浓度分别为:01005,0101,01015,0102,0103,0104,0108,0116(单位为:ΛIU󰃗ml)。将空白样品编号为S0,上述浓度溶液依次编号为S1,S2,S3,S4,S5,

Ξ作者简介:郑　沁(1981-),女,检验师。

　　　通讯作者:黄亨建,联系电话:0282822615;E2mail:huanghenjian@sina.com。

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S6,S7,S8。每种浓度溶液分装成20管,-20℃冰

箱保存备用。

11213　检测低限[3]:测定空白样本20d,计算其均值及标准差[3]。按9917%可能性定义检测低限(lowerlimitofdetection,LLD),LLD=θx空白+3s空白。

11214　功能灵敏度[3]:测定系列低浓度检测限样品20d,计算各浓度的变异系数,绘制浓度与CV的关系曲线图,以TSH理论浓度为X轴,各浓度的变异系数为Y轴,从曲线上查阅CV为20%所对应TSH浓度,即为功能灵敏度。2　结果

211　空白样品与系列低浓度样品20d检测结果　见表1。

　表1　促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度实验结果样品编号

S0S1S2S3S4S5S6S7S8

限值。从图1可见,当CV为20%时,对应的TSH浓度约为01011ΛIU󰃗ml,就是本检测系统测定TSH的功能灵敏度。

　表2　系列低浓度检测限样品天间重复实验结果样品编号

S1S2S3S4S5S6S7S8

TSH(ΛIU󰃗ml)0100501010010150102001030010040010080011600

发光强

度均值

1311321535619485176511280612153715304414

s

CV(%)

58156814611651104812451844116318

441502518017130111007140516021802110

理论TSH浓度(ΛIU󰃗ml)

00100501010010150102001030010400108001160

发光强

度范围

5～10451002～11981105～13391227～14281372～151552～17111703～18782446～26083909～4148

θx

968151099181232191325141412161916177417250519401218

s

421758156814611751104812451944116318

图1　TSH功能灵敏度标准曲线

3　讨论

311　TSH检测为中心的策略评估甲状腺功能目

LLD=θx空白+3s空白=96815+3×4317=1096.6　　结果表明空白样本测定的发光强度109616,

212　检测低限　计算9917%可能性的检测低限(LLD)。

此发光强度为分析检测系统的噪音,也就是TSH的检测低限。从表1可见,其检测低限所产生的发光强度相当于样品编号中的S1(01005ΛIU󰃗ml)所产生的发光强度。TSH的检测低限01005×(1096.6󰃗1099.8)=0.00498ΛIU󰃗ml(约为01005ΛIU󰃗ml)。

213　功能灵敏度　功能灵敏度(FS):天间重复CV=20%时对应的检测限样品的浓度。它代表的是一个定量的可报告低限。将S1～S8各浓度的发光强度均值减去空白样本S0的均值,计算其s、CV值,结果见表2。

　　绘制浓度与CV的关系曲线图,以TSH理论浓度为X轴,各浓度的变异系数为Y轴。从曲线上查阅CV为20%所对应TSH浓度,即为功能灵敏度,也是检测系统可以定量报告的TSH结果的低

前已经在诊断甲状腺疾病时广泛采用。TSH一线策略之所以能够简化试验项目,关键在于TSH检测的功能灵敏度提高了100倍,从20世纪70年代利用放免方法的第一代TSH为1～2mU󰃗L,第二代TSH为011～012mU󰃗L到目前的采用增强化学发光方法的第三代TSH为0101～0102mU󰃗L,正是由于第三代TSH检测范围的扩大,尤其在低含量时功能灵敏度的明显提高,对TSH浓度变化的监测可以准确了解甲状腺功能状态。

312　检测低限是指理论上能够将分析物与本底噪音区分开的待测物的最低浓度值,这个值一般是一个理想值,并不代表实际检测中可以达到这个数值,是基于零浓度基础上,用于区分从无到有的分析能力,表达式为LLD=θx空白+3s空白和LLD=θx空白+2s空白。功能灵敏度又称临床灵敏度(clinicalsensitivity),其概念则是指在实际检测中能够测到的待测物的最低浓度值。根据批间变异系数(CV)=20%时的最大稀释管浓度作为功能灵敏度,这个值一般要比检测低限高,区分从有到无的分析能力,由于它反映了实际检测中的灵敏度,所以更有

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临床价值。Westgard对方法学的确认中的分析灵敏度包括了检测低限、生物检测限和功能灵敏度。313　检测低限为样品单次检测可以达到的检测响应量对应的分析物量,反映了方法对空白样品测定的噪音。检测系统或方法对小于或等于检测低限的分析物量只能报告为“无分析物检出”。RocheE170检测系统测定TSH的最低检测限为01005ΛIU󰃗ml,与Roche厂家的产品说明书声称的一致。

314　功能灵敏度即以天间重复CV为20%时对应的检测限样品具有的平均浓度。它代表的是一个定量的可报告低限。早在19年,著名内分泌专家

[5]

Spencer首先提出了以天间重复CV为20%时,对应的TSH浓度为实验方法可以报告的最低量值。本室RocheE170检测系统测定TSH的功能灵敏度为01011ΛIU󰃗ml,厂家报告的功能灵敏度为0.014ΛI环境U󰃗ml,可能由于各实验室仪器状态、情况、工作人员对仪器的操作情况、样本情况均存在差异。检测低限一般在临床用于测定原体内不存在的分析物;而功能灵敏度在临床上用于测定原体内存在的极微量的分析物,因此,对于促甲状腺激

素(TSH)的评价,功能灵敏度更有实际意义。参考文献:

[1]　StockigtJR.Guidelinesfordiagnosisandmonitoringof

thyroiddisease:nonthyroidalillness[J].ClinChem,1996,42:188—192.

[2]　SpencerCA,LoprestiJS,PatelA,etal.Applicationsof

a

new

chemiluminometric

thyrotropin

assay

to

subnormalmeasurement[J].JClinEndocrinolMetab,1990,70(2):453—460.

[3]　JamesO.Westgard,Ph.D.MethodValidation2

SelectingAMethodtoValidation..www.westgard.com.[4]　SpencerCA.Thyroidprofilingforthe1990s:freeT4

estimateorsensitiveTSHmeasurement[J].JClinImmunoassay,19,12:82—.

[5]　SpencerCA,TakeuchiM,KazarosyanM,etal.

Interlaboratory󰃗intermethoddifferencesinfunctionalsensitivityofimmunometricassaysofthyrotropin(TSH)andimpactonreliabilityofmeasurementofsubnormalconcentrationsofTSH[J].ClinChem,1995,41:367—3741

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收稿日期:2007201215

日立7020全自动生化分析仪故障排除与应用

阴志琦　(郑州市第三人民医院检验科,河南郑州　450000)

中图分类号:R44619　文献标识码:B　文章编号:167127414(2007)032060201

　　我科在对日立7020全自动生化分析仪几年的使用过

程中,不断摸索和探讨,积累了一些故障排除及应用方面的经验,在此介绍如下。1　故障排除

111　报警提示反应槽水位下降

11111　原因:①内部供水滤器阻塞或被面给水滤器阻塞,造成反应槽供水不足;②反应槽内液面传感器感应能力下降。

11112　处理:①取出供水滤器进行清洗后复位;②把试剂HITERGENT换用蒸馏水与生理盐水混合液(无比例要求),以增加液体内离子浓度,提高传感器的液面感应能力。在菜单中的维护项打开反应槽换水画面,重复至反应槽水位上升到正常高度。112　报警提示液量设定

11211　原因:①已设定的样品和试剂总量小于180Λl或大于500Λl;②某一试剂加入量误输为“0”或未输入试剂量;③新输入项目的试剂号与已用项目的试剂位置号重复,并且液量的设定不相符。

11212　处理:①起始测光点时,样品和试剂的总量设定应大于180Λl,最大量不应超过500Λl;②检查试剂R1～R3的输入量是否正确;③把原有暂停使用项目的58号参数改为“0”。

113　报警提示FD未插入

Ξ作者简介:阴志琦(1975-),女,本科,主管技师。

11311　原因:①驱动器内所放置的软盘有损伤;②软盘驱

动器脏污。

11312　处理:①更换一张新的备份软盘;②用驱动器清洗盘进行驱动器的清洗。2　使用

211　笔者在进行一个月一次的反应槽及反应槽排水滤器的清洗工作后,做杯空白测定,测得值总是超过仪器所要求的范围±800。后来笔者发现在维护画面作反应槽换水后产生的泡沫黏附在比色杯外壁,是导致杯空白测定值超范围的主要原因。我们试用在进行反应槽换水前先向反应槽内加入400ml蒸馏水和015mlHITERGENT液,可避免气泡产生,使杯空白得以顺利通过。

212　日立7020全自动生化分析仪试剂盘位置较少,当需要进行新项目的开发实验时,就会有试剂位不足的现象,影响新项目开展。我们经过试用,找到一种较为简便的解决方法,操作步骤如下:①选[维护]键,选[软盘操作]键,拷贝一张新的参数软盘;②将新参数软盘放入软盘驱动器1,选[维护]键,选[参数读写]键,选[读出]键;③在所读出的参数中,将新项目的参数输入,在开始条件下作校准,选[维护菜单]键,选[参数读写]键,选[写入]键,制作出一张新项目的参数软盘,存档保存;④当需要进行某一项目的实验时,放入相应的参数软盘,做参数读出步骤,在试剂盘中放入相应的试剂,进行工作。收稿日期:2006209204