维普资讯 http://www.cqvip.com 第２ｌ卷第４期 ２００２年７月 分析测试学报 ＦＥＮＸＩ ＣＥＳＨＩ ＸＵＥＢＡＯ（Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ） Ｖ０】．２ｌ Ｎｏ．４ Ｊｕ１．２０ｏ２ 当归中藁本内酯的超临界ＣＯ ２萃取一毛细管 气相色谱定量分析 黄宝华 ，张 规 ，关燕琼 ，周晓辉 （１．广东工业大学轻工化工学院，广东广州５１００９０；２．广东工业大学实验研究中心，广东广州５１００９０） 摘要：为研究超临界ｃ０：萃取当归中主要活性成分之一的藁本内酯的工艺条件，建立了毛细管气相色谱法 定量分析藁本内酯含量的方法，样品的超临界萃取物在ＳＥ．５４毛细管柱上，以１３０℃一１９０ ｏＣ一２２０ ｏＣ的二阶 柱升温程序，正十八烷为内标定量分析；藁本内酯在０．７～１．８ ｇ／Ｌ范围内呈良好的线性关系，精密度试验 ＲＳＤ为２．２％（ｎ＝６），回收率为（９６±２）％。 关键词：当归；藁本内酯；气相色谱法；超临界萃取 中图分类号：Ｑ９４９．７６３．３；Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—４９５７（２００２）０４—００７７—０２ 藁本内酯是当归挥发油中含量较高的活性成分ｈ】，但其性质不稳定，可采用在较低温度下选择 性可调且无溶剂残留的超临界ＣＯ 萃取法提取该活性成分。为探讨超临界ＣＯ 萃取当归中藁本内酯 的最佳工艺条件，作者建立了当归萃取物中藁本内酯的毛细管气相色谱测定法。方法简便、快速， 分析结果令人满意。 １ 实验部分 １．１ 仪器、试剂及实验材料 北京分析仪器厂Ｖａｒｉａｎ ＳＰ．３４００气相色谱仪，配ＦＩＤ及ＢＦ．９２０２色谱工作站：迪马ｓＥ．５４毛细管 柱，３０ Ｉｎ×０．２５ Ｉｎｌｎ ｉｄ，液膜厚０．２５／．ｔｍ；注样器温度２３５ ｏＣ；检测器温度２４０ ｏＣ；柱升温程序：初温 １３０ ｏＣ，以８ ｏＣ／ｒａｉｎ升温速率升至１９０℃，然后以４℃／ｍｉｎ速率升至２２０ ｏＣ并保持２ ｍｉｎ；柱前压 ８２．７ ｋＰａ；载气Ｎ ，尾吹气流量２８．６ ｍＬ／ｍｉｎ；分流进样，分流比２２．８：１，进样量１ Ｌ。 ＨＰ６８９０ＧＣ／５９７３ＭＳ气相色谱一质谱联用仪。离子源ＥＩ；电子能量７０ ｅＶ；离子源温度：２４０ ｏＣ； 连接口温度：２８０ ｏＣ；色谱柱ＨＰ．１ ３０ ｍ×０．２５ ｍｍ ｉｄ，液膜０．１ ｍ；柱温：初温１００ ｏＣ，以ｌ０ ｏＣ／ｍｉｎ 升温速率升至２６０ ｏＣ；进样口温度２５０ ｏＣ，载气Ｈｅ；柱前压８０ ｋＰａ；进样量０．５ Ｌ。 美国ＩＳＣＯ １００ＤＸ超临界萃取器，ＳＦＸ２．１０ Ｍ １００Ｄ注射泵。 无水乙醇、氯仿、石油醚、乙醚、香兰素均为分析纯，正十八烷为色谱纯。 藁本内酯（１ｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ）对照品：从当归中通过溶剂提取，柱色谱纯化而得，经Ｇｃ—ＭＳ鉴定含量为 ９８％（ ）。 当归头片购自广州市药材公司，产地为甘肃，在４０℃烘２ ｈ，粉碎，瓶装置干燥器备用。 １．２ 当归中藁本内酯的超临界流体萃取（ＳＦＥ） 准确称取若干份０．５００ ０ ｇ当归粉碎样品分别置入萃取槽中，调节一定萃取温度（３５～４５℃）、压 力（３０～４５ ＭＰａ），限流管９ｏ℃，以正交试验选择萃取条件（详细内容另文发表）。以盛有无水乙醇的 ５ ｒｎＬ具塞刻度试管冰浴中吸收提取物。所得提取物的乙醇溶液供ＧＣ定量测定和ＧＣ—ＭＳ定性分 析。 １．３ 藁本内酯对照品的制备 称取经粉碎的当归ｌ０３ ｇ，先后共以２６０ｍＬ石油醚（６０～９ｏ℃）分３次以索氏提取器回流提取，每 次提取３遍，每遍４ ｈ，合并提取液，减压蒸去溶剂得蒸干物，参照文献【２，３】方法多次柱色谱分离提 取藁本内酯，减压蒸去溶剂，所得提取品送Ｇｃ—ＭＳ分析，藁本内酯含量为９８％（ ）。 １．４溶液配制 内标液：准确称取十八烷０．２ ｇ于１０ ｍＬ容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，配成２０ ｇ／Ｌ 收稿日期：２００１—０７—１２；修回日期：２００２—０２—２７ 作者简介：黄宝华（１９６３一），女，福建南安人，副教授，硕士 维普资讯 http://www.cqvip.com 分析测试学报 第２１卷 十八烷内标液待用。 标准溶液：分别称取３．７、４．８、５．７、７．０、７．８、９．０ ｍｇ藁本内酯对照品于６个５ ｍＬ容量瓶中，各 加内标溶液３Ｏ Ｌ，以无水乙醇定容，摇匀。 样品溶液：于ＳＦＥ收集液中加入３０ ｌｘＬ内标液，以无水乙醇定容至５ ｍＬ，摇匀，得样品溶液。 ２ 结果与讨论 ２．１ 色谱分离条件及内标物的选择 本研究采用内标法测定提取产品中的藁本内酯。提取产品组成复杂，柱温采用二阶程序升温。 内标物曾先后选用萘、环己酮、苯乙酮、香兰素、正十八烷和十四醇，前４个化合物较藁本内酯早出 峰，且相距较远；十四醇则较迟出峰，拖尾且与样品中其它组分峰有重叠。正十八烷在选定分离条 件下不拖尾，出峰时间１４．１４ ｍｉｎ，与藁本内酯（１３．５０ ｍｉｎ）相近但完全分离，且不受其他组分干扰。 故选择十八烷为内标物。色谱图如图１所示。 ２．２ 藁本内酯的线性范围 采用内标法对当归的ＳＰＥ提取品中藁本内酯进行定量分析。把上述标准系列溶液色谱进样１ Ｌ，测定对照品藁本内酯峰面积与内标峰面积之比（ｙ ，以Ｙ对藁本内酯的加入量（ｇ／Ｌ） 进行线性 回归，得回归方程为Ｙ：０．９７９ 一０．１９６，ｒ：０．９９９，线性范围 为０．７～１．８ ｇ／Ｌ。 ２．３精密度测定 在选定色谱条件下，用１．１４ ｇ／Ｌ和１．５６ ｇ／Ｌ的对照品溶 液测量方法的精密度，其相对标准偏差ＲＳＤ分别为１．８％和 ２．２％（／＂ｔ＝６）。 ２．４ 样品分析及回收率的测定 取４份ＳＦＥ萃取样进样１ Ｌ，测定结果见表１。 在上述４份样品中加入定量的藁本内酯，摇匀，进样１ 图１样品色谱图 Ｆｉｇ．１ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ Ｌ．其回收率结果见表１。平均回收率为（９６±２）％。 表１样品分析结果及回收率 １．１ｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ；２．ｏｃｔａｄｅｅａｎｅ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ） Ｔａｂｌｅ １ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ ３ 结 语 本研究建立的藁本内酯的毛细管气相色谱内标定量法简便、快速、准确、可靠。通过对不同条 件下当归的ＳＦＥ提取液中藁本内酯的定量比较，进而研究和确定超临界ｃＯ：萃取法提取当归中的藁 本内酯的最佳工艺条件。本法也可用于分析当归制剂中的藁本内脂。 广东省测试分析研究所吴惠勤等同志对本项研究给予热情帮助，在此谨表谢忱。 参考文献： ［１１刘文成，张益民，罗习东．当归［Ｍ】．北京：科学普及出版社，１９８６．９． ［２】 陈耀祖，张惠迪．当归化学成分分析研究——根部非挥发性成分研究［Ｊ】．高等学校化学学报，１９８４，５（４）：５１５— ５ｌ９、 ［３】 陶静仪，阮于平，梅其柄，等．当归成分藁本内酯平喘作用的实用研究【Ｊ】．药学学报，１９８４，１９（８）：５６１—５６５． 维普资讯 http://www.cqvip.com 第２ｌ卷第４期 分析测试学报 Ｖ【ｌ１．２ｌ Ｎｏ．４ ２００２年７月 ＦＥＮＸＩ ＣＥＳＨＩ ＸＵＥＢ￣Ｏ（Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ＩｎｓｔｒＵｍｅｎｔａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ） Ｊｕ１．２ｏｏ２ 鸡肉中多种磺胺兽药残留量测定的 高效液相色谱一电化学检测法 王建华，林黎明，陈长法 （青岛出入境检验检疫局食品实验室，山东青岛２６６００２） 摘要：采用液相色谱电化学法测定了鸡肉中磺胺类药物残留量；磺胺用氯仿提取后，取部分提取液用氮气 吹干，残渣溶于ＫＨ，２０ 中，用正己烷脱脂，水相进样，液相色谱分析用Ｃ。 柱，流动相为甲醇一０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ３￣Ｏ （ｐＨ ６，体积比２５：７５），检测电位１．０Ｖ；与紫外检测器相比，电化学检测器（ＥＣＤ）有更高的灵敏度和 选择性，ＥＣＤ的检出限为磺胺嘧啶０．０２ ｎｇ，磺胺甲氧哒嗪０．０６ ｎｇ，磺胺甲基异口恶唑０．０７ ｎｇ。 关键词：高效液相色谱；安培电化学检测；磺胺类药物；残留物；鸡肉 中图分类号：ＴＳ２５１．５５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—４９５７（２００２）０４—００７９—０３ 磺胺类药物（ＳＡｓ）广泛用于预防和治疗食源性动物的疾病，然而过量使用这些抗生素会导致在食 用动物产品中残留。这些残留物对人体有不良影响。因此，欧盟将磺胺类药物列为必须严格监控 的药物，并制定了动物源食品中磺胺的最大残留限量为１００￣ｇ／ｋｇ…。 ＧＣ和ＧＣ—ＭＳ对肉、奶中磺胺类药物残留的测定灵敏度高而且专属性强，但需要繁冗的净化和 衍生步骤 １，不适合大量样品的分析。液相色谱紫外检测法也有许多应用 ，但灵敏度低。有些分 析方法基体干扰严重。 美国农业部食品安全检查局（ＦＳＩＳ）采用荧光胺衍生的薄层色谱（ＴＬＣ）筛选方法 】。这种方法灵 敏度、选择性较好，但重复性不够好。 近年来，用荧光胺柱前衍生或柱后衍生，进行磺胺测定的液相色谱荧光检测法已成为测定动物 组织多种磺胺快速分析方法 ，这种方法灵敏度、选择性都较好。液相色谱与大气压化学离子或热 喷雾质谱联用技术已成为确证生物组织中磺胺兽药残留的方法 】，但一般实验室很难配置这样的仪 器。 本文提出了采用液相色谱电化学检测器（ＥＣＤ）测定禽肉中多种磺胺残留方法。通过与二极管阵 列检测器（ＤＡＤ）进行比较，发现ＳＡ在ＥＣＤ上响应比ＤＡＤ至少高一个数量级。本法具有灵敏度高、 专属性好的优点。 收稿日期：２００１—０８—０５：修回日期：２００２—０３—１９ 作者简介：王建华（１９６８一），男，山东青岛人， 工二程师，硕士 ＼ ；＼！ 一 ／； ！ ｉ＼ ，ｉ ， ＼－ ｉ ， ； ：＼！ ｔ ｉ ｉ 一 ｔ 一ｉ＼！， ：＼． （上接７８页） Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ ｉｎ Ｒａｄｉｘ Ａｎｇｅｌｉｃａｅ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｂｙ ＳＦＥ——Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＧＣ ＨＵ．￣ＮＧ Ｂａｏ—ｈｕａ ，ＺＩ－Ｅａ＿ＮＧ Ｋｕｎ ，ＧＵＡＮ Ｙａｎ—ｑｉｏｎｇ ，ＺＨＯＵ Ｘｉａｏ—ｈｕｉ （１．Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｇｔｍｒｒｇｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００９０，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｔｍｒｒｇｚｈｏｕ ５１００９０，Ｃｈｉａｎ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｉｎ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｉｎ Ｒａｄｉｘ Ａｎｇｅｌｉｃａｅ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ．Ａ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｇａｓ ｃｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ Ｗａｓ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｈｏｐｉｎｇ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｕｐｅｒｃｆｉｔｉｃａｌ ｌｆｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ａ ＳＥ一５４ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｓｅｃｏｎｄ ｏｒｄｅｒ ｐｒｏｇｒａｎｕｎｅｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ Ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｏｅｔａｄｅｃａｎｅ ａｓ ａｎ ｉｎｔｅｍａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉＤ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｅａｋ ａｒｅａ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．７～１．８ ｇ／Ｌ．Ａ ＲＳＤ ｏｆ ２．２％（ｒｔ＝６）ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ（９６±２）％ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ；ＳｕｐｅｒｃｒｉｉｆｃＮ ｆｌｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｒａｄｉｘ Ａｎｇｅｌｉｃａｅ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ
