枣杞合剂拮抗环磷酰胺对小鼠毒副作用的效应观察

湖南中医学院学报

JournalofHunanCollegeofTCM

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枣杞合剂拮抗环磷酰胺对小鼠

毒副作用的效应观察

文志斌,汉建忠,何晓凡,刘发益,熊石龙,李俊成,贺石林

(中南大学湘雅医学院生理教研室,湖南长沙410008)

　　摘要:目的　观察枣杞合剂对小鼠是否具有拮抗环磷酰胺毒副作用的效应,为临床提供有效的化疗辅

助药物。方法　对小鼠行大剂量环磷酰胺(CY)腹腔注射,并用枣杞合剂灌胃预防,以观察枣杞合剂对CY毒副作用的影响。结果　注射CY后,CY组小鼠外周血中红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白计数明显降低,碳粒清除率明显下降,至实验第18d全部死亡;而枣杞合剂能明显延长小鼠的存活时间,增加单核-吞噬细胞系统的碳粒廓清率,升高外周血中红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白计数,与CY组相比,P<0.01。结论　枣杞合剂具有拮抗CY对小鼠毒副作用的效应。

关键词:枣杞合剂;环磷酰胺;毒副作用;动物实验;小鼠;补中益气中图分类号:R285.5　　文献标识码:A;　文章编号:1000-5633(2001)04-0021-03

EffectsofZaoqiMixtureonResistancetoSide-effects

ofCyclophosphamideinMice

WenZhibin,HanJianzhong,HeXiaofan,etal(DepartmentofPhysiology,XiangyaMedicalCollege,Central-SouthUniversityChangsha,Hunan410008)

　　Abstract:Objective:ToevaluatethepreventiveeffectsofZaoqimixture(ZQM)onresistancetoside-effectsofcyclophosphamide(CY)inmice.Methods:Micewereatrandomdividedintothecontrol,CY,CYplusleucogenandCYplusZQMgroups.AftertheinjectionofleucogenorZQM,CYwasintraperitoneallyinjectedinhighdoseandthepreventiveeffectsofZQMonresistancetoside-effectsofCYwereobserved.

Results:AscomparedwiththesingleCYandtheCYplusleucogengroups,ZQMsignificantlyprolongedthesurvivaltimeandincreasedtheRBC,WBCandplateletcountsinperipheralbloodintheCYtreatedmice.Inaddition,ZQMalsoincreasedclearanceofcarbonparticlesfromcirculatingbloodoftheCYtreatedmice.Conclusion:ZQMmayhavethefunctionofantagonizingtheside-effectsofCYinmice.

Keywords:Zaoqimixture;cyclophosphamide;side-effect;animal;mouse;invigoratingspleentoreplenishQi

　　环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)是临床上用于治疗恶性肿瘤和自身免疫性疾病的一种常用且有效的化疗剂。但其毒副作用较大,特别是抑制骨髓造血,致外周血中红细胞、白细胞和血小板减少,以及明显的胃肠道反应使病人食欲下降、免疫力低下[1]。由于这些毒副作用,使CY的用量和疗程

收稿日期:2001-06-25

基金项目:国家教育部优秀青年教师资助课题(教人司[2001]39号)

作者简介:文志斌(1962-),男,湖南长沙人,博士研究生,中南大学湘雅医学院生理教研室副教授,主要从事中草药对心脑血管疾病的防治研究。

均受到了。为了减轻CY类化疗剂的毒副作用,临床上常辅用一些升白细胞药,如利血生、肌酐等,但效果不理想。

因此,为了寻找有效的拮抗化疗剂毒副作用的药物,我室进行了以下实验,现报道如下。

22湖南中医学院学报

计算印度墨汁的碳粒廓清率K值:

K=

logD2-logD20

T20-T2

2001年第21卷

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　动物　雄性昆明种小鼠,体重20～25g。购自中南大学湘雅医学院动物学部。

1.1.2　药材　注射用CY(上海第十二制药厂生产,200mg 瓶),临用前溶于20ml生理盐水中;利血生购自湘雅医院药房,0.2g 片,临用前研磨,溶于20m1生理盐水中;印度墨汁,Chroma-GesellSchaftSchmidGmbhandCO产品;枣杞合剂各组药购自湘雅医院中药房,水煎3次后合并煎液,加无水酒精沉淀(乙醇终浓度为65%)过夜,过滤蒸馏乙醇后浓缩(相当于含生药0.83g ml)备用。1.2　方法

1.2.1　枣杞合剂对小鼠生存时间和外周血象的影响　取小鼠40只,称重并随机分为4组:①生理盐水对照组;②CY组;③CY+利血生组;④CY+枣杞合剂组。实验第1d,各组小鼠行尾静脉取血做红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(Pt)和血红蛋白(Hb)计数。取血计数后,生理盐水组和CY组用生理盐水按0.2ml 10g体重灌胃;CY+利血生组用利血生悬液按0.2ml 10g体重灌胃(相当于200mg kg体重);CY+枣杞合剂组用枣杞合剂按0.2ml 10g体重灌胃,每天1次,连续12d。实验第4d,生理盐水对照组腹腔注射生理水,0.1ml 10g体重;其余各组腹腔注射CY,按0.1ml 10g体重(相当于100mg kg体重)给药,每天1次,连续8d。第12d各组行尾静脉取血,测RBC、WBC、Pt和Hb,并称重。然后停止灌胃,继续观察并记录小鼠死亡时间。实验第20d后未死亡者不继续观察。1.2.2　枣杞合剂对小鼠碳粒廓清率的影响　另取小鼠40只,分组及处理同上,但CY的注射改为隔天1次,共注射8次。实验第20d,按以前的方法[2]做碳粒廓清率测定:由小鼠尾静脉注射2倍生理盐水稀释的印度墨汁0.05ml 10g体重,30s内注射完毕。注射后2及20min从眼眶后静脉丛取血20μl,加入2ml蒸馏水中,用722型分光光度计比色,623μm波长下读数。以D2和D20分别表示2及20min时的吸光度,T2与T20分别代表注射印度墨汁后2及20min并按下式

1.3　统计方法

全部计量资料用x±s表示,各组间比较用F检验,两两比较用q检验,P<0.05示有显著性差异,P<0.01示有非常显著性差异。

2　结果

2.1　枣杞合剂对小鼠一般状态及生存时间的影响

生理盐水对照组小鼠活动良好,毛发光泽,实验期间均有体重增加;注射CY后2d,CY组和CY+利血生组小鼠活动明显减少,体重逐渐减轻,毛发枯黄,并逐渐出现脱毛,注射CY后第6d开始出现死亡,至实验第18d两组小鼠全部死亡,两组间生存时间比较无显著性差异(P>0.05);CY+枣杞合剂组小鼠一般状态良好,活动及摄食量没有明显变化,3只小鼠体重没有变化,7只小鼠体重增加,实验期间无1只小鼠死亡,与CY组和CY+利血生组相比,差异非常明显(P<0.01),见表1。

表1　枣杞合剂对小鼠体重与生存时间的影响　(n=10,x±s)组对CY

照

别组组

体重(g)+6.5±0.9-2.9±1.0＊＊-3.0±1.2＊＊+1.9±1.7##

存活时间(h)>408

179.6±38.5＊＊214.9±45.7＊＊>408##

CY+利血生组CY+枣杞组

　　注:+示体重增加;-示体重降低;与生理盐水对照组比＊＊P<0.01;与CY组比##P<0.01。

2.2　枣杞合剂对小鼠外周血象的影响

至实验第12d第2次行小鼠尾静脉取血前,CY组及CY+利血生组各有2只小鼠死亡。CY组RBC、WBC、Pt和Hb计数均较对照组明显降低(P<0.01);CY+利血生组的各项计数值均高于CY组(P<0.01),但均明显低于CY+枣杞合剂组(P<0.01),见表2。

表2　枣杞合剂对小鼠外周血RBC、WBC、Pt及Hb计数的影响

组

别

n108810

RBC

(×1012 L)+0.04±0.02-15.8±4.5＊＊-6.4±3.0##-2.1±1.4■■

WBC

(×109 L)+0.1±0.1-13.5±0.3＊＊-5.8±0.5##-0.6±0.2■■

Pt

(×109 L)-0.02±0.01-6.9±0.21＊＊-4.6±0.1##-1.5±0.2■■

Hb

(g L)

(x±s)

对　照　组CY

组

CY+利血生组CY+枣杞组

-0.1±0.2-7.0±0.4＊＊-5.4±0.4##-3.0±0.5■■

　　注:+示第2次计数高于第1次计数,-示第2次计数低于第1次计数;与生理盐水对照组比＊＊P<0.01;与CY组比##P<0.01;与CY+利血生组比■■P<0.01。

2.3　枣杞合剂对碳粒廓清率的影响

生理盐水对照组的K值为0.0302±0.00;而CY组碳粒廓清率明显下降,K值为0.0069±0.0007,与生理盐水对照组相比,有非常显著性差异(P<0.01);CY+利血生组与生理盐水对照组比,K值明显降低,差异具有显著性意义(P<0.01),与CY组比较,差异无显著性意义(P>0.05);CY+枣杞合剂组K值与生理盐水对照组相比,无显著性差异(P>0.05);但明显高于CY组(P<0.01)和CY+利血生组(P<第4期文志斌,等　枣杞合剂拮抗环磷酰胺对小鼠毒副作用的效应观察23

0.01),差异具有非常显著性意义(注射印度墨汁时,对部分小鼠注射失败,故各组n数不相等),见表3。

表3　枣杞合剂对小鼠碳粒廓清率的影响组对CY

照

别组组

n9666

K　　值0.0302±0.000.0069±0.0007##0.0091±0.0018##0.0290±0.0017＊＊++

(x±s)

脾胃,除积冷,通血脉之功用[4]。现代医学研究发现,山楂对胃肠活动具有双向调节作用,促进胃肠消化酶的分泌,且本身含有脂肪分解酶,并有抑菌作用[4,5],枸杞和山楂等有抗氧化作用,加速氧自由基的清除,减轻氧自由基诱导的透明质酸解聚作用[5,6];肉桂水提物能通过增加胃肠粘膜血流量,改善微循环,抑制应激性溃疡的形成,同时刺激PGE2的产生,对胃肠细胞起保护作用[7]。持续大剂量CY注射能使胃肠粘膜变性坏死,形成溃疡,使小鼠出现食欲下降和体重减轻。枣杞合剂可能通过以上几个相互迭加或相互协调的药理机制而起作用。枣杞合剂能提升外周血象,其作用明显优于利血生。作者认为枣杞合剂的这种作用可能与刺激骨髓造血干细胞造血有关。国内学者研究发现,枸杞多糖能刺激红系和粒系的分化与成熟,增加外周血网织红细胞计数,促进脾脏T淋巴细胞分泌集落刺激因子,并增强其对粒-单系祖细胞的刺激作用[6];大枣含大量cAMP,能增加白细胞计数和升高白细胞内cAMP的含量[4];大枣、山楂、枸杞和肉桂等能增加小鼠单核-吞噬细胞的吞噬能力,增加机体的免疫能力,加速受损DNA的修复[4～8]。本室的结果与上述报道相一致。临床资料表明,许多严重的病理过程,其最终结局与单核—吞噬细胞的吞噬能力存在明显的相关关系。枣杞合剂组小鼠全部存活,可能与此有关。体外实验显示枸杞有抑制体外肿瘤细胞生长的作用[9]。因此,枣杞合剂与CY联用于肿瘤治疗,不但能降低CY的毒副作用、延长疗程,而且有可能起到抗肿瘤的协同作用。

CY+利血生组CY+枣杞组

　　注:与生理盐水对照组比##P<0.01;与CY组比＊＊P<0.01;与CY+利血生组比++P<0.01。

3　讨论

CY为潜伏化氮芥类烷化剂,属细胞周期非特异性药物,主要阻断G2期细胞进入体内后被肝微粒体酶P-450或肿瘤细胞内存在的磷酸酶水解而活化,释放出氮芥基,与DNA的磷酸键结合,使DNA变性、失活或断裂,从而抑制肿瘤生长[1]。因为CY与DNA的这种作用没有特异性,对正常的组织细胞也具有杀伤作用,特别是对增殖分化较快的骨髓造血组织、淋巴组织、胃肠粘膜上皮细胞、毛囊和生殖细胞等抑制作用明显。病人多出现骨髓抑制、免疫力低下和脱发等毒性反应,而这些毒副作用常成为用量和发挥疗效的主要障碍。为了减轻病人在使用化疗剂中出现的这些毒副作用,临床上常辅用利血生、肌酐和维生素B4等,以收升高白细胞、增加病人对化疗药物的耐受性等功效[3],但往往只能减轻部分反应,达不到治本的作用。本实验结果显示:CY能明显抑制骨髓造血,致外周血RBC、WBC、Pt和Hb计数明显降低;小鼠活动减少,摄食量明显减少,体重减轻;单核-吞噬细胞吞噬K值降低。利血生在一定程度上能拮抗CY对骨髓的抑制作用,使外周血3大血细胞计数和血红蛋白计数均较CY组明显升高。但它不能改善小鼠的一般状态,实验期间小鼠体重逐渐减轻,且不能提高小鼠单核-吞噬细胞的吞噬能力,实验期间小鼠全部死亡。

为了减轻CY的毒副作用,为临床提供有效的化疗辅助药,本室根据中医补中益气、温阳活血的理论,经正交设计实验,选用大枣、枸杞、肉桂和山楂等中药配伍组成枣杞合剂。实验结果显示:枣杞合剂具有明显改善小鼠一般状态的作用,实验小鼠体重增加,且无1只死亡;外周血3大血细胞计数和血红蛋白计数较CY组和CY+利血生组明显升高;吞噬K值也明显高于CY组和CY+利血生组小鼠。作者认为这些作用可能与枣杞合剂具有调整消化系统功能,同时能促进胃肠消化及对胃肠粘膜细胞具有保护作用有关。中医理论认为:大枣具补脾胃、养心安神、保肝和抗疲劳等作用;枸杞能明目、滋补肝肾;山楂消积食,散瘀血;肉桂具有补元阳,暖

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