广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０１０，１７（３）：２５５～２５８ 大鼠大脑中动脉供血区梗死后小脑皮质ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ 动态表达 ＊ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ ｏｆ Ｃｅｒｅｂｅｌ ｌ ａｒ Ｃｏｒｔｅｘ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｄｄｌ ｅ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ａｒｔｅｒｙ Ｓｕｐｐｌｙ Ａｒｅａ ｉｎ Ｒａｔｓ 李 洁 ，车玉琴 ，康志伟 ，林 巧 ＬＩ Ｊｉｅ ，ＣＨＥ Ｙｕ—ｑｉｎ ，ＫＡＮＧ Ｚｈｉ—ｗｅｉ ，ＬＩＮ Ｑｉａｏ （１．中国医科大学附属第四医院神经内科，辽宁沈阳 １１００３２） （１．Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃ，ｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，１ １００３２，Ｃｈｉｎａ） 摘要：采用Ｌｏｎｇａ大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备动物模型，用实时定量ＰＣＲ法检测大鼠大脑中动脉闭塞后 小脑皮质胶质纤维酸性蛋白ｍＲＮＡ的表达。结果显示，持续性大鼠大脑中动脉闭塞后，胶质纤维酸性蛋白 ｍＲＮＡ在大鼠的小脑皮层有动态表达，第１天、第３天和第５天比对照组明显增高（Ｐ＜０．０５），第７天、第１Ｏ 天和第ｌ４天比对照组明显下降（Ｐ＜０．０５）。大鼠大脑中动脉闭塞后小脑皮质出现胶质纤维酸性蛋白动态表 达，远离梗死灶的相关部位脑组织继发损害机制可能与神经抑制因子有关。 关键词：脑梗死小脑ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ（胶质纤维酸性蛋白ｍＲＮＡ） 中图法分类号：Ｒ７４２．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５—９１６４（２０１Ｏ）０３—０２５５—０４ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＡＰ）ｍＲＮＡ ｉｎ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｃｏｒｔｅｘ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆｔｅｒ ｒａｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａ１ ａｒｔｅｒｙ Ｏ一：ｃｌｕｓｉｏｎ．Ｔｈｅ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｏｎｇａ’Ｓ Ｂｏｌｔ １ｉｎｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ（ＭＣＡ０）ｉｎ ｍｉｄｄｉｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｆ ｒａｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑｕａｎｌ：ｉｌａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ，ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ ｈａｓ ｄｙｎａｍｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｃｏｒｔｅｘ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ １ｓｔ，３ｎｄ ａｎｄ ５ｔｈ ｄａｙ，ｂｕｔ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ７ｔｈ，１ ０ｔｈ ａｎｄ １ ４ｔｈ ｄａｙ ｉｎ ｃｏｍｐｃｅｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｈａｍ～ｏｐｅｒａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ａｆｔｅｒ ｒａｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＧＦＡＰ ｉｎ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｃｏｒｔｅｘ，ｗｈｉｃｈ ｏｃｃｕｒｓ ｆａｒ ａｗａｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｄａｍａｇｅ ｔＯ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｎｅｕｒａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ，ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ（ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍＲＮＡ） 脑卒中是威胁中老年人健康的常见病和多发病， 属于大脑中动脉（ＭＣＡ）供血区，并且大脑中动脉闭 塞（ＭＣＡＯ）后患侧黑质和丘脑损害发生较晚，提示黑 质和丘脑损害非缺血所致。Ｂｌｏｃｋ等 研究发现，局灶 随着人口老龄化，其发病率明显上升，并严重威胁中 老年人的健康和生存质量。先前有关缺血性卒中的研 究主要集中在梗死灶局部，对远隔梗死灶的相关研究 未给予足够重视。现已有文献报道，脑梗死造成的神 经功能缺损不仅与梗死灶局部损伤后神经细胞坏死 和凋亡有关，而且也与远隔梗死灶的相关部位的继发 性神经细胞坏死和凋亡损害有关＿】 ］。黑质和丘脑不 收稿日期：２００９—０８ ０３ 修回日期；２０１０－０５—１１ 性脑缺血后丘脑、黑质网状部、海马和脊髓等部位观 察到继发性改变，这些区域出现以小胶质细胞和星形 胶质细胞激活为特征的改变。另外，局灶性脑桥梗死 可导致梗死灶同侧或双侧小脑中脚继发性损害 ｊ，局 灶性皮质下梗死可引起胼胝体继发性损害 ］，提示与 梗死灶有神经纤维联系的远隔部位都有发生继发性 损害的可能。细胞的坏死和凋亡发生的速度和严重程 度受许多因素影响。Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ等＿８ 研究发现，脑 作者简介：李洁（１９８５一），女，硕士研究生，主要从事神经病学研究。 ＊辽宁省教育厅科学技术研究项目（项目编号：２００６０９９８）资助。 缺血后的各种抑制因素的存在是导致神经纤维再生 ２５５ 广西科学 ２０１０年８月 第１７卷第３期 受限的重要原因，这些抑制性的因素包括胶质疤痕、 （ＭＣＡＯ）适当改良后进行。模型制备方法：把大鼠用 神经生长抑制因子以及神经营养因子障碍。目前，有 关于远隔梗死灶的脑组织发生继发损害的确切机制 尚未完全阐明，可能与神经营养障碍、神经生长抑制 因子、局部脑血流减少、神经递质调节失衡以及蛋白 １Ｏ 水合氯醛（３００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后，将大鼠 仰卧位固定在实验台上，取颈正中切口，切开皮肤，钝 性分离各层组织，分离右侧颈总动脉（ＣＣＡ），向上分 离右颈外动脉（ＥＣＡ）、颈内动脉（ＩＣＡ），在近右侧颈 总动脉分叉处约５～８ｒａｍ处结扎右颈外动脉，于右 合成抑制等因素有关。其中，神经营养障碍以及神经 生长抑制因子作用增强被认为是重要的因素之一。因 此，采取各种有效手段减轻脑梗死后远隔部位继发性 损害，可能对梗死后神经功能恢复有重要意义。本研 究对照观察大鼠大脑中动脉闭塞后大鼠小脑皮质胶 侧颈总动脉近心端夹一动脉夹，在右颈外动脉近分叉 处留置一打好结的丝线，在右颈外动脉结扎处与分叉 处之间做一直径约０．２ｍｍ的“Ｖ”型切口，将尼龙线 自切口处轻轻插入，轻轻收紧线结，松开动脉夹，将尼 质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ） 的动态变化，研究远离梗死灶的相关部位脑组织继发 损害机制与神经抑制因子的关系。 １材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 实验动物及分组 ＳＰＦ级Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，体质量２５Ｏ～３００ｇ，由 中国医科大学实验动物中心提供。大鼠饲养于恒温净 化通风动物房，自由进食和饮水，室温保持（２５± ２）Ｃ。将大鼠随机分为假手术组（３０只）和实验组（３０ 只）。两组大鼠又按实验第１天、第３天、第５天、第７ 天、第１Ｏ天、第１４天各分为６个组，每组５只。 １．１．２主要试剂和仪器 试剂：无ＲＮＡ酶的水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；无ＲＮＡ酶的糖原（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；ＲＮＡ酶抑制剂（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）；ＭＭＬＶ 反转录酶（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）；１０×ＲＴ缓冲液（２５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，ｐＨ值８．３，２００ｍＭ ＫＣ１，４０ ｍＭ ＭｇＣ１２，５ ｍＭ ＤＴＴ，Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）；２．５ ｍＭ ｄＮＴＰ混合液 （ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ和ｄＴＴＰ各２．５ｍＭ，ＨｙＴｅｓｔ Ｌｔｄ）Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１８（上海生工生物工程有限公司出 品）；１０×ＰＣＲ缓冲液（Ｐｒｏｍｅｇａ）；Ｔａｑ聚合酶 （Ｐｒｏｍｅｇａ）；１００ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ（天根生化科技（北 京）有限公司出品）；１００００×Ｓｙｂｅｒｇｒｅｅｎ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ） 仪器：ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（宝生物工程 有限公司出品）；Ｈ６—１微型电泳槽（上海精益有机玻 璃制品仪器厂出品）；Ｒｏｔｏｒ—Ｇｅｎｅ ３０００ Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ 仪（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）引物设计软件：Ｐｒｉｍｅｒ ５．０ Ｒｏｔｏｒ—ｇｅｎｅ ６．０（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）；Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ） １．２实验方法 １．２．１ 动物模型的制作 参照Ｌｏｎｇａｌｇ 的大鼠大脑中动脉内栓线阻断法 ２５６ 龙线顺右颈外动脉经颈内动脉送入颅内，插人深度约 （１８．５±０．５）ｒａｍ微遇阻力时停止，使尼龙线头端位 于大脑中动脉起始处，阻断大脑中动脉的血流。收紧 丝线，海绵胶止血，缝合切口，单笼饲养。假手术组只 进行麻醉和血管分离术，不结扎血管及导人线栓。 １．２．２神经功能评分 参照Ｌｏｎｇａ＿ｇ 的评分标准进行５分制神经功能 评分。０分为无神经功能缺损症状（肢体活动正常），１ 分为轻度局灶性神经功能症状缺失（不能完全伸展左 侧前肢），２分为中度局灶性功能缺失（行走时向偏瘫 侧及右侧旋转），３分为重度神经功能缺失（自主运动 时向右侧倾倒），４分为极重度损伤（不能自发行走， 意识水平降低）。将评分在１～３分的动物纳入下一步 实验，其余动物予以排除。 １．２．３ 实时定量ＰＣＲ检测 总ＲＮＡ纯化提取：全部大鼠按不同时间点处 死，并将右侧小脑半球放入去ＲＮＡ酶的试管中，液 氮速冻，一８０℃保存。取１００ｍｇ小脑皮层组织标本剪 碎、研磨后置于离心管中，加入ｌｍｌ ＴＲＩＺＯＬ，按试剂 说明书中操作步骤进行ＲＮＡ提取。ＧＦＡＰ引物： ｓｅｎｓｅ５ 一ＧＧＧＡＧＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡ一３ 。 ａｎｔｉｓｅｎｓｅ５ 一ＣＡＣＣＧＴＣＴＴＴＡＣＣＡＣＧＡＴＧＴＴＣ一３ ： ＧＡＰＤＨ引物： ｓｅｎｓｅ５ 一ＧＧＡＡＡＧＣＴＧＴＧＧＣＧＴＧＡＴ一３ ， ａｎｔｉｓｅｎｓｅ５ 一ＡＡＧＧＴＧＧＡＡＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴ一３ 。 使用分光光度仪检测抽提总ＲＮＡ的质量和浓度，要 求Ａ瑚／Ａ 。的比值在２．０左右，并记录ＲＮＡ含量。 ｃＤＮＡ的合成：每１份标本取总ＲＮＡ ２ ｇ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ） ｌｇｌ，加无ＲＮＡ酶的Ｈ Ｏ至总体积１０ｇｌ，混合液在 ７０℃水浴３ｍｉｎ，降到３７ Ｃ放置１０ｍｉｎ；加５×反应缓 冲液４ｇｌ，ＲＮａｓｉｎ核酸酶抑制剂１ １，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ ＪＦ１，ＭＭＬＶ反转录酶１ ｌ，混合后３７ Ｃ恒温 ｌｍｉｎ；加１０ ｌ的ＲＴ反应液到１Ｏ ｌ退火混合物中， ３７℃水浴６０ｒａｉｎ，加热到９５Ｃ维持５ｍｉｎ。 ＢＤＮＦｍＲＮＡ实时定量ＰＣＲ：ｃＤＮＡ１Ｆ１，１０ Ｘ反应缓 Ｇｕａｎｇｘｉ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．３，Ａｕｇｕｓｔ ２０１０ 冲液２．５ ｌ，２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ２．５ ｌ，Ｔａｑ聚合酶 删 一 ｐ／ ｑ Ｉ】 ｕ们 Ｊｏ Ｉｄ Ｏ Ｏ ｌｕｎｉｔｓ，２５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣ１２１．２ ｌ，５ｕｍｏｌ／Ｌ上、下游引物 混合物２ １，１０×ＢＤＮＦ Ｉ４ｔ＊ｌ，加ＤＥＰＣ处理的双蒸水 至２５ｔＡ。将溶液混合，设置ＰＣＲ反应为９５Ｃ变性３ ｍｉｎ，５５ Ｃ退火ｌｒｎｉｎ，７２ Ｃ延伸５ ｍｉｎ，４０个ＰＣＲ循 环（９４ Ｃ，２０ｓ；５９ Ｃ，２０ｓ；７２ Ｃ，３０ｓ）；建立ＰＣＲ产物 豳ｉ Ⅱ ０ ∞ Ｏ 逛 的熔解曲线，扩增反应结束后继续从７２ Ｃ缓慢加热 到９９ Ｃ（每５ｓ升高１ Ｃ）（内参ＧＡＰＤＨ基因反应条 件相同）。将不同浓度的定量模板的对数和相应的ｃｔ 值作图，制成标准曲线。根据绘制的梯度稀释ＤＮＡ 温度Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（￣Ｃ） 图２ ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ反应曲线 Ｆｉｇ．２ ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ ｍｅｌｔｉｎｇ ｃｕｒｖｅ ａ，ｂ，Ｃ，ｄ．ｅ分别是假手术组１ｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ，１Ｏｄ；ｇ，ｈ，ｉ，ｊ，ｋ 分别是实验组ｌｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ，１４ｄ． 标准曲线，ＧＦＡＰ基因与ＧＡＰＤＨ基因的浓度结果直 接由机器生成。ＧＦＡＰ基因浓度除以ＧＡＰＤＨ基因的 浓度，即为此样品ＧＦＡＰ基因的校正后的相对含量。 所有大鼠均以上述实验方法得出结果。 １．３统计学处理 采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件。数值以均数士标准差 （ｚ±５）表示，组间比较采用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异 有显著性。 ２ 结果 ２．１ ＰＣＲ产物的特异性 图１和图２结果显示，定量ＰＣＲ产物的熔解曲 线只有１个峰，而且熔解温度均一，峰形锐利，在曲线 的其他位置未见到波形，说明扩增产物为特异性产 物，无引物二聚体及非特异性产物产生。 ， ８Ｕ ８５ ９０ ９， 温度Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（￣） 图１ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ反应曲线 Ｆｉｇ．１ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ ｍｅｌｔｉｎｇ ｃｕｒｖｅ ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ分别是假手术组１ｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ，１０ｄ；ｇ，ｈ，ｉ，ｊ，ｋ 分别是实验组１ｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ，１４ｄ． ａ，ｂ，Ｃ，ｄ，ｅ ａｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｌｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ，１０ｄ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｇ，ｈ，ｉ，Ｊ，ｋ ａｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｌｄ，３ｄ，５ｄ， ７ｄ，１ ４ｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ２．２ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ表达水平 从表１结果可以得出，实验组大鼠的ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ表达在大脑中动脉闭塞后第１天、３天和５ 天比假手术组大鼠的明显增高（Ｐ＜０．０５），第７天、 第１０天和第１４天比假手术组大鼠的明显下降（Ｐ＜ ０．０５），说明大鼠大脑中动脉闭塞后，ＧＦＡＰｍＲＮＡ 在小脑皮质有动态表达。 广西科学 ２０１０年８月 第１７卷第３期 ａ，ｂ，Ｃ，ｄ，ｅ ａｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｌｄ，３ｄ，５ｄ，７ｄ．１０ｄ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｇ，ｈ，ｉ，ｊ，ｋ ａｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｌｄ，３ｄ，５ｄ， ７ｄ，１４ｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ３讨论 在中枢神经系统，不仅存在着能促进神经元生 长、存活和影响神经可塑性的神经营养因子，还存在 许多抑制神经细胞生存、生长和修复的抑制因子，如 存在于细胞外基质的生长抑制因子（ＧＩＦ）和硫酸软 骨素蛋白多糖，少突胶质细胞产生的轴突生长抑制蛋 白，如Ｎｏｇｏ—Ａ、髓鞘相关糖蛋白和少突胶质细胞／髓 鞘糖蛋白。。‘“］，星形胶质细胞产生的胶质纤维酸性 蛋白（ＧＦＡＰ）等。未成熟的星形胶质细胞对轴突生长 有导向作用，但是随着成熟程度增加，其分泌的促轴 突生长的营养因子逐渐减少，而分泌的ＧＦＡＰ含量 逐渐增加；在病理情况下，大量成熟的星形胶质细胞 在损伤脑组织周围分泌大量的ＧＦＡＰ，成为直接阻碍 神经再生的屏障。实验研究发现，大脑中动脉闭塞后 １周同侧纹状体和丘脑腹后外侧核抑制性蛋白 ＧＦＡＰ表达逐渐增加，星形胶质细胞明显增生、肥大， 提示脑梗死后远离梗死灶脑组织发生继发性损害与 神经组织周围存在神经生长抑制因子有关＿＿ １。Ｌｉｎ 等ｎ。。研究发现，脑梗塞后神经元减少的同时伴有反 应性星形胶质细胞增殖，且在脑梗塞后１周，星形胶 质细胞增殖增多，４周后更明显。ＧＦＡＰ是星形胶质 细胞的标志蛋白，在星形胶质细胞中有丰富的、唯一 的表达，可以作为中枢神经系统损伤后星形胶质细胞 反应增生的标志。有实验表明，ＧＦＡＰ的表达与星形 胶质细胞的活性呈正比ｌ１ ，而且，ＧＦＡＰ阳性胶质细 胞数目的增加与ｍＲＮＡ水平的增加是相一致的＿１ 。 本研究结果显示，持续性大脑中动脉闭塞后 ＧＦＡＰｍＲＮＡ在其远隔部位的小脑皮层有动态表达， 第１天、第３天和第５天较假手术组明显增高，第７ 天、第１０天和第１４天较假手术组明显下降，其动态 表达在时间上与文献报道有一些出入，分析与远隔部 ２５７ 表１ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ表达水平 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＧＦＡＰ ｍＲＮＡ ＊： ＜Ｏ．０５，与对照组比较。＊：Ｐ＜Ｏ．０５，ＶＳ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． 位的不同组织对其脑缺血反应性不同有关。以往研究 表明，神经元损伤不仅可由直接作用于细胞体的伤害 引起，轴突的退行性改变也可以引起神经元损伤。当 神经纤维断裂后，轴突发生华勒变性一断端远侧轴突 自近向远变性解体。小脑血液供应为后循环即椎基底 动脉系统而非大脑中动脉，因此大脑中动脉阻断后引 起小脑皮质的分子生物学改变并非直接缺血导致，可 能与小脑失联络有关，也就是说，皮质桥小脑通路中 断的结果。其机制可能与神经传导通路中断有关 ］。 大脑皮质是皮质桥脑通路的起源地，其投射纤维传导 至对侧小脑半球颗粒细胞的兴奋性冲动，因此皮质桥 小脑通路的损害可使对侧小脑功能障碍。从大脑皮质 与小脑皮质问存在大量的神经纤维联系以调节精确 的运动，当一侧大脑中动脉闭塞后神经纤维突触间联 系中断，远隔区小脑皮质在早期出现神经轴突再生、 突触重建等结构修复，后期逐渐出现神经元数量减 少、功能下降和轴突再生减弱，伴随着其变化，星形胶 质细胞在数量上也有动态变化，因而就出现ＧＦＡＰ 表达的变化。 目前，脑梗死后神经可塑性与神经营养因子的相 关性研究较多，而与抑制因子的相关性研究较少。本 研究通过大鼠大脑中动脉持续性闭塞模型，观察大鼠 小脑皮质ＧＦＡＰ的动态变化，从而研究远离梗死灶 的相关部位脑组织继发损害机制与神经抑制因子的 关系。因此，如何干预脑梗死后神经生长抑制因子对 梗死灶周围和远隔部位神经组织的影响是今后卒中 后神经可塑性研究的方向之一。同时，这也为改善远 期神经功能、神经损伤和再生问题提供新的思路。 参考文献： ［１］Ｂｕｓｓ Ａ，Ｐｅｃｈ Ｋ，Ｍｅｒｋｌｅｒ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｌｏｓｓ ｏｆ ｍｙｅｌｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ Ｗａｌｌｅｒｉａｎ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ，２００５，１２８（２）：３５６—３６４． ｒ－ｚ］ Ｍｏｌｌｅｒ Ｍ，Ｆｒａｎｄｓｅｎ Ｊ，Ａｎｄｅｒｓｅｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｏｒｔｉｃｏｓｐｉｎａｌ ｔｒａｃｔｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｒｏｋｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｆｂｒｅｔｒａｃｋｉｎｇ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００７，７８ （６）：５８７—５９２． ｉ－３］ Ｗａｎｇ Ｆ，Ｌｉａｎｇ Ｚ，Ｈｏｕ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｇｏ—Ａ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｘｏｎａ１ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈａｌａｍｕｓ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｆｏｃａｌ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］． ２５８ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，２００７，４１７（３）：２５５—２６０． ［４３ Ｚｈａｏ Ｆ，Ｋｕｒｏｉｗａ Ｔ，Ｍｉｙａｓａｋａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｔ（２）一ｖａｌｕｅ，ａｐｐａｒｅｎｔ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ ｎｉｇｒａ ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｅｘｏｆｏｃａｌ ｐｏｓｔｉｓｃｈｅｍｉｃ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２００１， ８９５（１—２）：２３８—２４４． Ｉ ５ Ｊ Ｂｌｏｃｋ Ｆ，Ｄｉｈｎｅ Ｍ，Ｌｏｏｓ Ｍ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａｒｅａｓ ｏｆ ｒｅｍｏｔｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｆｏｃａｌ ｂｒａｉｎ ｌｅｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，２００５，７５（５）：３４２—３６５． ［６］Ｍｅｊｄｏｕｂｉ Ｍ，Ｃａｔａｌａａ Ｉ，Ｃｏｇｎａｒｄ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｗａｌｌｅｒｉａｎ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｐｅｄｕｎｃｌｅｓ ｄｕｅ ｔｏ ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ ｐｏｎｔｉｎｅ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ， ２００６，３３（４）：２６３—２６５． ［７］ Ｍｅｇｕｒｏ Ｋ，Ｃｏｎｓｔａｎｓ Ｊ Ｍ，Ｃｏｕｒｔｈｅｏｕｘ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｔｒｏｐｈｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｐｕｓ ｃａｌｌｏｓｕｍ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ［Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｒａｄｉ０ｌｏｇｙ，２０００，４２（６）：４１３—４１９． ［８］Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ Ｃ Ｍ，Ｔｓａｉ Ｓ Ｙ，Ａｌｓｂｉｅｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｎｅｕｒｏａｎａｔｏｍｉｃａｌ Ｐ ｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ａｎｄ ＩＮ２１ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｒａｔＥＪ］．Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，２００２，５１（４）：４３３２４４１． ［９］Ｚｅａ Ｌｏｎｇａ Ｅ，Ｗｅｉｓｔｅｉｎ Ｐ Ｒ，Ｃａｌｓｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃｒａｎｉｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９，２０（１）：８４． ［１Ｏ３ Ｔａｋｅｔｏｍｉ Ｍ，Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ Ｎ，Ｋｉｍｕａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｇｏ—Ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｔｕｒｅ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｒａｔ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｔｕｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ， ２００２，３３２（１）：３７—４０． ［１１］Ｂｕｓｓ Ａ，Ｓｅｌｌｈａｕｓ Ｂ，Ｗｏｌｍｓｌｅｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ Ｎ０Ｇ０一Ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，２００５，１１０（２）：１１３—１１９． ［１２］ 曾进胜，李华，洪华，等．实验性大脑皮层梗死后丘脑和 纹状体突触重构与抑制性蛋白表达［Ｊ］．中国临床康 复，２００２，６（１７）：２５３４—２５３５． ［１３］Ｌｉｎ Ｂ，Ｇｉｎｓｂｅｒｇ ＭＤ，Ｂｕｓｔｏ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｂａｃｕｔｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｇｌｏｂａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｒａｔｓ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒ１），１９９８，９５（５）：５１５－５２３． ［１４］Ｐｅｔｉｔｏ Ｃ Ｋ，Ｍｏｒｇｅｌｌｏ Ｓ，Ｆｅｌｉｘ Ｊ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｔｗｏ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐｏｓｔｉｓｅｈｅｍｉｅ ｒａｔｓ ｂｒａｉｎ口］．Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ ＦｌｏｗＭｅｔａｂ，１９９９，１０（３）：８５０— ８５９． ｒ１５］Ｈｉｎｋｌｅ Ｄ Ａ，Ｂａｌｄｗｉｎ Ｓ Ａ，Ｓｃｈｅｆｆ Ｓ Ｗ，ｅｔ ａ１．ＧＦＡＰ ａｎｄ Ｓ１ ００ｂｅｔａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｔｅｘ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｍｉｌｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｃｏｎｔｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ， １９９７，１４（１Ｏ）：７２９—７３８． （责任编辑：邓大玉） Ｇｕａｎｇｘｉ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏ１．１ ７ Ｎｏ．３，Ａｕｇｕｓｔ ２０１ ０
