制备色谱DAC100动态柱装填

一．装柱条件准备

1.装柱场所准备

装柱空间要求为洁净场地，环境温度18--26℃，湿度45--65％

2.装柱工具准备

2.1 装柱气源压力应为0.6-0.8MPA

2.2确保装柱设备清洗干净，待用

2.3准备好装卸DAC100工具

3..装柱的物料准备（反相色谱柱）

色谱级的甲醇（20L）和异丙醇（5L）。

纯净水、无水乙醇、氢氧化钠

4.装柱测试评价液准备

名称：萘或者甲苯

浓度：萘/甲醇＝1mg/ml，或者甲苯/甲醇= 1mg/ml

二． 动态柱装柱前工作准备

1. 打开气源，将DAC100动态轴向压缩柱液压表打到100bar左右（我们建议100*250mmFUJI -C18 10um 100A 的柱头压力为100bar）

2. 清洗活塞、下端盖、色谱柱柱管

柱头和柱底的清洗方法如下：

方法一 ：在确认活塞、端盖无堵塞的情况下采用以下步骤：

A. 用清水清洗活塞、端盖，再用洗洁精洗去除表面污渍。

B. 清洗后用洗洁精水溶液超声清洗20-30分钟去除油脂。

C. 再用清水超声2-3次。

D. 最后用机溶剂（如异丙醇）超声2-3次

方法二：在确认活塞、端盖堵塞的情况下采用以下步骤：

a、用清水清洗活塞、端盖，再用洗洁精洗去除表面污渍。

b、用2mol每升氢氧化钠溶液浸泡至少12小时，浸泡以后用纯水冲洗1小时，然后用超声清洗6次以上，每次大概超声10-15分钟，再用PH计测试PH值，保证最后清洗的清水PH值约为7。

c、用无水乙醇超声2次，每次10-15分钟。

色谱柱柱管内壁的清洗方法如下：

用装有异丙醇的洗瓶，淋洗色谱柱柱管内侧，使柱管内侧无固体颗粒附着。

3. 制作匀浆溶液

A. 称量填料重量，并计算应加异丙醇的重量。计算方法：干填料和异丙醇的重量比是：干填料/异丙醇=1/2-2.5L ，DAC100动态轴向压缩柱总共所需的FUJI -C18 10um 100A干填料为1.2-1.3kg。

B. 向匀浆瓶中倒入计算好重量的异丙醇，然后将剩余好的填料和补充的填料缓慢加入匀浆瓶中，边加边搅拌,直到填料全部加到瓶里。

C. 缓慢的搅拌均匀，一般搅拌约20Min。

4. 色谱柱下柱底和活塞的安装：

将清洗好的端盖，活塞，卡箍等按要求在动态柱上安装好，并把下端盖出液口位置用堵头堵死。

5.检查以上工作是否准备妥当，准备好后进行装柱

1. 将油压表的读数打到100bar（此数值因具体填料及情况而定），确认气源开关处于“OFF”位置，方向开关处于“DOWN”位置，活塞处于最上端位置，将保压阀打开。

2. 将匀好的填料通过漏斗倒入柱筒中

3. 拿开漏斗，打开气源开关， 气源开关处于“ON”位置，使活塞向下运动

4. 当活塞头上端液路管有液体流出时，观察有无气泡排出，当气泡排尽后立即将气源开关关闭，用堵头将其堵上，并将下端盖堵头拧开。

5.匀浆液通过色谱柱下端盖接口流出，流入废液桶

6.静置0.5小时后，将色谱柱与检测设备连接。

三． 色谱柱性能测试

1.色谱柱的平衡

1.用纯甲醇做流动相,流量100ml/Min,运行10Min

2.用纯甲醇做流动相，流量300ml/Min,运行5Min

3.监测基线，在满量程100mv时，基线水平，说明系统已平衡。

2.色谱柱的测试及重复性

1. 将标样（萘或者甲苯）进样0.2ml后，用纯甲醇，以150ml/min的流速运行，并点击“采集谱图”，运行20min，待出完峰后点击“手动停止”，将图谱保存，并关闭泵。

2. 了解装柱后主峰萘或者甲苯的理论塔板数和拖尾因子的情况。一般我们认为新填料的柱效的标准是每米的理论塔板数大于等于20000，且1.2kg的FUJI -C18 10um 100A的填料柱长是250mm。

3. 重复（1）的过程3次，保存图谱。

4. 比较6次图谱的峰的重复性如何，主要是比较主峰萘或者甲苯的理论塔板数、拖尾因子和保留时间，看看每次的主峰萘或者甲苯的理论塔板数、拖尾因子和保留时间是否一致、重现性如何。

5. 以上措施实施后满足要求就可以重新平衡柱子，进行相关实验。

四．注意事项

1.在正式装柱过程中，装柱时间越快越好，尽量的缩短中间过程的时间，这样才能达到最佳的装住效果。

2.拆卸色谱柱上下柱头过程中应小心仔细，所有配件应妥善保管，防止里面部件的缺失造成不必要的麻烦

3.甲醇、乙醇和异丙醇等都是有毒试剂，装柱过程中应佩戴口罩和手套