实验与检验医学２００８年ｌ０月第２６卷第５期 ・实验研究・ 急性白血病形态学与免疫学分型分析 孙培玉 中图分类号Ｒ７３３．７．Ｒ４４６．１ ｌ ３ 文献标识码Ａ 文章编号１６７４一ｌ１２９（２００８）０５—０５１】一０３ ［摘要】目的探讨急性白血病形态学及免疫学分型的应用及诊断价值。方法采用ＦＡＢ形态学分 型及免疫学分型方法 结果１１７例急性白血病中诊断ＡＭＬ７８例，ＡＬＬ３３例，其中３３例ＡＬＬ中形态学 与免疫学不符合的６例．７８例ＡＭＬ中不符合的３例．６例ＣＭＬ—ＢＰ慢粒急变病例１例不符合。结论 急性白血病免疫学分型在一定程度上弥补了形态学分型的不足．是对形态学分型的补充和修正：对自血 病的诊断和分型有重要的指导意义．特别对急性淋巴细胞白血病可确定细胞类型ｆＢ淋巴细胞或Ｔ淋巴 细胞１．对ＭＯ、Ｍ７、ＨＡＬ等免疫分型不可缺少．对其诊断有着重要意义 ［关键词】急性自血病；形态学分型；免疫学分型 急性白血病（ＡＬ）ＪＥ确分型是准确及时治疗的前 者可采用外周血涂片１ 涂片用ＤＡＫＯ笔分隔成小 提 以细胞形态学和细胞化学染色为基础的ＦＡＢ形 块．置纯丙酮固定５—１Ｏ分钟后即刻置于洗涤液内 态分型仍是临床广泛应用的基本方法．但亦有其局 浸洗３分钟／次．三次。取出涂片，用吸水纸吸干分隔 限性 形态学与免疫学分型已成为急性白血病诊断 线上水分．血膜不要干涸 依次滴加单克隆一抗，置 和分型的重要依据 现将我院诊治的ｌｌ７例急性自 湿盒内３Ｏ分钟佳！温２０～２５￣Ｃ１．后置洗涤液内浸洗３ 血病形态学与免疫学分型分析如下 分钟／次，三次。滴加反应聚合物ｆ二抗），置湿盒内３０ １材料与方法 分钟ｆ室温２０～２５￣Ｃ），后置洗涤液内浸洗３分钟／次。 １．１一般资料本组ｌ１７例为初发或复发的急性 滴加显色剂５～１０分钟（室温２０～２５℃１，流水冲洗，苏 白血病患者，年龄ｌ ８２岁。其中男７８例，女３９例． 木素复染后流水冲洗３～５分钟，待千．镜检。细胞膜 均经临床、血象、骨髓象和细胞化学染色等按ＦＡＢ 或细胞浆见鲜红色沉淀物者为阳性表达．细胞膜或 分型标准确诊．其中ＡＬＬ ３３例．ＡＭＬ ７８例．ＣＭＬ— 细胞浆未见鲜红色沉淀物者为阴性表达 需要注意 ＢＰ ６例。 的是应选择病理性细胞观察其表达情况 １．２骨髓细胞形态学检查及组织化学染色骨髓 ２结果 细胞形态学检查按常规进行骨髓穿刺涂片．经瑞一 ２．１按ＦＡＢ形态学分型方法．１１７例急性白血病 姬氏染色，油镜下分类计数２００个细胞．形态学分型 中ＡＬＬ ３３例，其中ＡＬＬ—Ｌ１ ６例、ＡＬＬ—Ｌ２ ２４例、 采用ＦＡＢ分型标准１３］．ＦＡＢ协作组自１９７６年提出 ＡＬＬ—Ｌ３ ３例；ＡＭＬ ７８例。其中ＭＯ ２例、Ｍ１ ９例、 ＡＭＬ及ＡＩＪＩＪ的形态学诊断标准．后又进行修改和增 Ｍ２ ３１例、Ｍ３ ９例、Ｍ４ ５例、Ｍ５ １８例、Ｍ６ ２例、Ｍ７ 补．本组病例采用此标准进行形态学分型．并结合过 ｌ例、混合型１例：慢性髓细胞自血病急性变（ＣＭＬ— 氧化物酶染色（ＰＯＸ），糖元染色（ＰＡＳ）。ｏ【一醋酸萘酚酯 ＢＰ１ ６例。其中ＡＭＬ—Ｍ２ ４例、ＡＬＬ—Ｌ２ ２例 酶染色及氟化钠抑制实验（ＮＡＥ／ＮａＶ）等细胞化学染 ２．２免疫学分型 色确诊急性白血病类型 ２．２．１ ＡＭＬ免疫表型表达ｌ１７例急性白血病中 １．３免疫分型试剂及实验方法 根据免疫分型诊断为ＡＭＬ的为７８例．免疫表型特 ｌ＿３．１抗体选择对于白血病分型选择主要应用 点见表ｌ。以ＭＰＯ、ＣＤ１３、ＣＤ３３、ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ６８表 的抗体有Ｂ细胞系（ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０１，Ｔ细胞系 达最多，其中ＭＰＯ仅２例阴性（ＭＯ １例。Ｍ７ ｌ例１。 （ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７），非淋巴细胞系（ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ３３、 纯髓系表达的为７２例．伴ＣＤ７阳性表达的４例．伴 ＣＤ６８、ＭＰＯ、ＣＤ４１、ＣＤ３４、ＨＬＡ—ＤＲ１等。试剂盒购自 ＣＤ１９阳性表达２例 ｌ例为粒一淋双系列型。其中骨 上海太阳生物技术有限公司 髓中原始粒细胞及原始淋巴细胞均＞３０％ｆ细胞化学 １．３．２实验方法采取骨髓及外周血涂片ｆ高白患 染色及免疫表型均支持１ 作者单位：２７６００３山东省临沂市人民医院 ２．２．２ ＡＬＬ免疫表型表达３３例表型特点见表 作者简介：孙培玉，男，本科，副主任技师．主任 ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａＩ＆Ｌａｂ Ｍｅｄ．Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０ｏ８．Ｖ０ｌ ２６．Ｎｏ５ 表ｌ ７８例ＡＭＬ形态学与免疫学表型特点比较 ２。３３例ＡＬＬ中Ｂ—ＡＬＬ为２６例，其免疫标记的阳 性率依次为ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１０。伴有髓系标志的依 次为ＣＤ１３ ２例、ＣＤ３３ １例、ＣＤ６８ １例。３３例中Ｔ— ＡＬＬ为７例，表达ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７和ＨＬＡ—ＤＲ。３３ 表２ ３３例ＡＬＬ细胞形态学与免疫学表型特点比较 例中髓系，Ｂ细胞系为４例，Ｔ／Ｂ细胞系为２例。 ２．２．３ ６例慢性粒细胞白血病急性变免疫表型表 达见表３。６例慢性粒细胞白血病急性变免疫表型 髓系表达４例，Ｂ—ＡＬＬ ２例。 表３ ６例慢性粒细胞白血病急性变形态学与免疫学表型特点比较 ３讨论 ＡＮＣ＜３０％亦应诊断ＡＭＬ—Ｍ 。ＮＥＣ计数是指不包括 细胞形态学和细胞化学染色为基础的ＦＡＢ形 浆细胞、淋巴细胞、组织嗜碱细胞、巨噬细胞及所有 有核红细胞的骨髓有核细胞数。在实际工作中。单 以原始细胞≥３０％作为ＡＭＬ—Ｍ 和Ｍ，的诊断标准 态学分型．和ＷＨＯ的形态学诊断标准【ｌ１仍是临床上 广泛应用的基本方法．但亦有其局限性，对于形态不 典型病例难以作出准确判断［２１ 随着检验方法的迅 速发展和对白血病生物学特点的认识加深．急性白 血病的诊断分型亦经历了细胞形态学为主到免疫 学、ＭＩＣ、ＭＩＣＭ分型的演变。ＭＩＣＭ分型已成为现代 仍可能有误。Ｍ强主要是以异常的中性中幼粒细胞 为主．Ｍ 是以多颗粒异常的早幼粒细胞为主，原粒 细胞不一定≥３０％仍可诊断为Ｍ曲或Ｍ 。此外，Ｍ４ 和Ｍ 中的单核细胞系应计数原始加幼稚单核细 胞．急性淋巴细胞中的原始细胞应包括原始和幼稚 淋巴细胞 世界卫生组织在总结ＦＡＢ分类优点的基 础上制定了ＷＨＯ诊断标准 需要注意的是除急性 白血病诊断所必需．其中形态学与免疫学分型已成 为急性白血病诊断和分型的重要依据。急性白血病 免疫学分型在一定程度上弥补了形态学分型的不 足．是对形态学分型的补充和修正．对白血病的诊断 和分型有重要的指导意义．特别对急性淋巴细胞白 红白血病外．ＷＨＯ分类的原始细胞百分比是指骨 髓所有有核细胞中原始细胞的百分比ｆ３】。 急性白血病的免疫分型是ＭＩＣＭ分型的一个 重要指标 目前免疫分型应用的技术主要有两种： 免疫组化染色技术和流式细胞术。免疫组化染色技 术其特点是简便快捷．细胞定位好。本组１１７例急 血病可确定细胞类型ｆＢ淋巴细胞或Ｔ淋巴细胞１，对 Ｍ。、ＡＵＬ、ＨＡＬ等免疫分型不可缺少，对其诊断有着 重要意义。 本组病例形态学仍按ＦＡＢ协作组提出的以原 始细胞≥３０％（ＮＥＣ１为急性白血病的诊断标准。１９８５ 年ＦＡＢ修订的标准指出．按全部骨髓有核细胞 性白血病中所检出７８例ＡＭＬ其中以ＭＰＯ、ＣＤＩ３、 ＣＤ３３、ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ６８表达最多，其中ＭＰＯ仅２例 阴性ｆＭ。１例，Ｍ １例）。纯髓系表达的为７２例，伴 ＣＤ７阳性表达的４例．伴ＣＤＩ９阳性表达２例。１例 为粒一淋双系列型，其中骨髓中原始粒（下转第４９２页） ｆＡＮＣ）计数原始细胞百分比和除外骨髓中原始及幼 稚红细胞（ＮＥＣ）计数原始细胞百分比。确定原始及幼 稚红细胞≥５０％．ＮＥＣ的原始细胞Ｉ＞３０％时，即使 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｌａｂ Ｍｅｄ．Ｏｃｔｏｂｅｒ ２ｏ０８．Ｖ０ｌ ２６．Ｎｏ５ 【１］Ｉ张军民，赵莉萍，吴坚，等．嗜麦芽窄食假单胞菌简易鉴定方法探 ｉｆｖｅ ｂｅｔａ——ｌａｃｔａｍ／ｂｅｔａ—－ｌａｃｔｍａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｏｎ— ｓｅｃｕｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｅｅａｅ ａｎｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇ－ 讨田．中华检验医学杂志，１９９８，２１（２）：ｌ１５． 【２】严碧琼，高英鸿，冯汉斌，等．３２１株非发酵革兰阴性杆菌的耐药性 报道叨．中华医院感染学杂志，２００８，１８（１）：９７ ９８． ｉｎｏｓａ［Ｊ］．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９４。３３：２３３． 【７］Ａｖｉｓｏｎ Ｍ Ｂ，Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｃ Ｓ，Ｆ０ｒｄ Ｐ Ｊ．Ｄｉｆｅｍｔｉａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｌａｎｄ Ｌ２ｂｅｔａｌａｃｔａｍａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ叨．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｏｒ，２００２，４４（７）：１７７８． 【８］谢翠娥，何周文，王北冰．嗜麦芽窄食假单胞菌在下呼吸道感染中 【３】叶惠芬，杨银海，陈惠玲，等．２００１年广州地区常见病原菌耐药性调 查．中国抗生素杂志。２００２，２７（１ ｏ１：６０２～６０５． ［４】贾坤如，胡龙华，胡晓彦，等．革兰阴性杆菌对亚氨培南耐药率变迁 册．中华医院感染学杂志，２００８，１８（１）：９２ ９４． 的耐药分析明．南华大学学报，２００５，３３（４）：５２９～５３１． 【９】Ｐｏｕｌｏｓ ＣＤ，Ｍａｔｓｕｍｕｒａ ＳＯ，Ｗｉｌｌｅｙ ＢＭ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｏ ａｃｔｒｉｖｔｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔｅｎｏｔｒｅｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｈｏｐｈｉｌｉａ叨． 【５】Ａｌｏｕｓｈ Ｖ，Ｎａｖｏｎ－Ｖｅｎｅｚｉａ Ｓ，Ｓｅｉｇｍａｎ－Ｉｇｒａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｈｉｄｒｕｇ—ｒｅ－ ｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｅｅｍｇｉｎｏｓａ：ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ【Ｊ］． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ，￣ｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００６，５ｏ（１）：４３－４８． Ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，ｔ９９５，３９（１ ０）：２２２０－２２２３． 【６］ＭｃＬａｕｇｌＭｉｎ ＪＣ，Ｈａｒｒｙ ＡＬ’Ｆｕｃｈｓ ＰＣ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ （上接第５１２页）细胞及原始淋巴细胞均＞３０％ｆ细胞化 免疫学特点早期细胞标记，如ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ３４、ＴｄＴ 学染色及免疫表型均支持）。３３例ＡＬＬ中Ｂ—ＡＬＬ为 等至少一个阳性 但随着某些新的系列特异性单抗 ２６例，其免疫标记的阳性率依次为ＣＤ１９、ＣＤ２０、 的获得，如髓系ＣＤ１１７、Ｂ淋巴系的ｎａｂ一１等，以使 ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ１０。伴有髓系标志的依次为ＣＤ１３ ４ 某些ＡＵＬ得以确定为ＡＭＬ—Ｍ。，其形态学上为分化 例、ＣＤ３３ ２例、ＣＤ６８ １例。３３例中Ｔ—ＡＬＬ为７例， 极差的细胞。细胞化学ＭＰＯ阴性或＜３％．免疫学为 表达ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７和ＨＬＡ—ＤＲ。３３例中髓系，Ｂ 淋系单抗阴性．超微水平结构ＭＰＯ或髓特异性单抗 细胞系为４例。Ｔ／Ｂ细胞系为２例。本组诊断中有４ ｆＭＰＯ、ＣＤ１３、ＣＤ３３）￣＇－－个阳性，大部分患者表达 例形态类似ＡＬＬ— 的急性白血病，经免疫学分型 未成熟细胞标记ＣＤ１ １７、ＣＤ３４等。ＡＭＬ—Ｍ７在其形 为ＡＭＬ—Ｍｏ ｌ例，ＡＭＬ—Ｍ。２例，ＭＡＬ １例。故对于 态学和化学染色上难与ＡＬＬ和分化差的急性髓细 ＰＯＸ＜３％，以原始细胞占绝对优势，特别是形态类似 胞白血病区分．造成诊断困难．免疫学仍是目前确诊 ＡＵ，＿ＩＪ２的急性白血病，不能单纯的考虑为ＡＬＬ，应 Ｍ７的主要手段，ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ６１、ｖＷＦ阳性，有时 做免疫组化分型以避免分型错误。６例慢性粒细胞 ＣＤ３４、ＣＤ１３、ＣＤ３３常阳性。ＷＨＯ将急性未分化细 白血病急性变（ＣＭＬ—ＢＰ）中，其中ＡＭＬ—Ｍ：４例， 胞白血病、双系列、双表型白细胞归为系列不明的急 ＡＵ ２例。大多数ＣＭＬ急变为ＡＭＬ，形态学和免 性白血病 疫学特征较明显。易于诊断。少数病例急变后细胞 ＭＩＣＭ分型由于检查手段耗时和难以普及等原 形态怪异。免疫表型紊乱，应用形态学和免疫学分型 因．形态学和免疫学分型仍是急性白血病诊断基础， 都较为困难．这种情况下，做遗传学和分子生物学检 免疫学分型在一定程度上弥补了形态学的不足．在 查十分重要。 某些ＡＬ最后诊断中起到关键作用．对临床急性白 某些ＡＭＬ可表达淋系相关抗原即淋系抗原阳 血病的诊断治疗及预后判断起着重要的作用［５１。 性的ＡＭＬ（Ｌｙ＋ＡＭＬ）．或某些ＡＬＬ表达髓系相关抗 参考文献 原（Ｍｙ＋ＡＬＬ）。一般认为仅异常表达个别次要非本系 【１］Ｈａｒｒｉｓ ＮＬ Ｊａｆｆｅ ＥＳ，Ｄｉｅｂｏｌｄ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ Ｗｏｄｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇｎｉｚａｔｉｏｎ 列相关抗原不能诊断双系或双表型白血病．而应诊 ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｏｐｌｓａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｎｄ ｌｙｍ— ｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅｓ：ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｄｖｉｓｏｒｙ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｍｅｅｔｉｎｇ，ａｉｄｉｅ 断Ｌｖ＋ＡＭＬ或Ｍｙ＋ＡＬＬ。Ｌｙ＋ＡＭＬ伴淋系抗原表达 ｈｏｕｓｅ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ［Ｊ］．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，２０００，３６：６９． 最多的是ＣＤ７、ＣＤＩ９。Ｍｙ＋ＡＬＬ对预后影响尚有争 【２】刘玲，金润铭．急性白血病免疫分型与临床研究叨．实用儿科ｌ临床 议。有人认为Ｍｙ＋ＡＬＬ预后差闱。 杂志．２００６，２１（１５）：９９６． 在形态学分型中．对分化差、ＭＰＯ阴性的白血 【３］张之南，沈悌主编．血液病诊断及疗效标准【Ｍ】．北京：科学出版社， 病往往误诊为ＡＩＪＬ。但实际上除ＡＬＬ外，还可能为 ２００７，１０５－１２１． ＡＵＬ、Ｍ０、Ｍ５、Ｍ７及一些少见类型白血病等，因此要 【４】Ｗｉｅｒｓｍａ Ｓ Ｒ，Ｏｒｔｅｇａ Ｊ，Ｓｏｂｌｅ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ—ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｂｌｓａｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｈｔ ａｃｕｔｅ 做免疫分型以确诊。在急性未分化型白血病（ＡＵＬ）指 ｌｙｍｐｈｏｂｌｓａｔｉｅ ｌｅｕｋｅｍｉ￣Ｊ］．Ｍｅｄ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｏｎｃｏｌ，１９９３，２１（２）：３４０～３４６． 细胞表面无特异性或系列相关抗原表达。细胞形态 ［５１刘晓红，孙培玉，刘桂娟，等．６３例急性白血病细胞形态学与免疫学 与细胞化学特征也无法确定其系列的ＡＬ。ＡＵＬ的 分型 ．临床检验杂志，２００４，２２（￣：４７０．